纳豆激酶活性的检测及纳豆粉筛选-论文.pdf

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1、食品科技2012年第37卷第10期FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY良品开发纳豆激酶活性的检测及纳豆粉筛选马恩平，陈超，夏泉，温波(新时代健康产业集团有限公司，北京100101)摘要：对纳豆激酶活性的检测方法进行了总结，结合生产及操作人员的实际情况总结出适合企业操作及评估的检测方法，并利用该方法对6种纳豆粉原料进行筛选，选择溶栓功能稳定、纳豆粉溶解性良好并经过脱臭处理的原料用于产品的生产。关键词：纳豆激酶；纤维蛋白；琼脂糖一纤维蛋白平板法中图分类号：TS201．25文献标志码：A文章编号：1005—9989(2012)10—0067—04Nattokin

2、aseactivitydetectionandnattofilterMAEn—ping，CHENChao，XIAQuan，WENBo(NewEraHealthIndustryGroup，Beijing100101)Abstract：Thispapersummarizesthedetectionmethodofnattokinase．Thinkingoftheactualsituationofproductionandpersonneloperations，wedevelopthetestmethodsforenterprise．Usingthismethod，weha

3、vecompletedthe6screeningofrawmaterials．Weselectedthequalityandstablerawmaterials．Keywords：nattokinase；fibrin；Agarosefibrinplatemethod国内研究者们所使用的纳豆激酶的溶栓活力断反应时间，所以不太适合灵敏度要求较高的样测定方法有琼脂糖一纤维蛋白平板法、血清板法、品活性测定，也不方便多个样品的同时测定。纤维蛋白块溶解时间法、四肽底物法、酶联反应四肽底物法f魏华、赵祥颖，2007)是根据枯吸附法等。草杆菌蛋白酶E的酶活测定方法改进的。在四肽琼脂糖

4、一纤维蛋白平板法(魏华、赵祥颖，底物Suc～Ala—Ala—Pro—Phe—PNA溶液中加入NK溶2007)是根据Astmp(1952)方法改进的，是目前最液，置于37水浴中孵育lmin，测定单位时间内常用的纤溶酶溶栓活力的测定方法。纤维蛋白平410nm处光吸收的变化。该法简便迅速，但不能板法也是目前国家卫生部测定尿激酶及蚓激酶等完全反映其纤溶活性，以及纤溶活性与所测得的溶栓酶活力的标准方法。此法简便易行，并可同蛋白酶活力之间是否有相关性。时测定多个样品，但由于溶解圈面积完全是表观血清板法f魏华、赵祥颖，2007)是根据纤维值，受恒温孵育时间影响很大。平板法改进的。血

5、栓纤维在655Fin处有最大吸光纤维蛋白块溶解时间法f魏华、赵祥颖，度值，随着纤维的溶解，吸光度会相应地降低。2007)是根据纤溶酶、T—PA、UK等溶血栓物质的该法简便快捷，样品消耗小，成本低，可信度活性测定方法改进的。此法迅速快捷，分辨率较高，可同时测定多个样品。大，更适于粗酶的活性测定，但由于需要精确判酶联免疫吸附法(ELISA1(魏华、赵祥颖，收稿日期：20l2-04—20食品科技FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY2012年第37卷第10期2007)是将NK特异性的单克降抗体吸附在微孔板京经科宏达生物技术有限公司；硼酸(分析纯)：和上，用BSA—

6、PBS冲洗并封堵未被吸附的部位，加光纯药工业株式会社；氯化钠(分析纯)：北京化学入NK样品，使之与单克隆抗体结合，再加入连有试剂公司；氢氧化钠f分析纯)：北京化工厂；蒸馏过氧化氢酶的多克隆抗体与两者结合。然后加入水：自制。新配制的底物溶液和HSO，测定490nm的吸光1．2主要设备值。该法灵敏度很好，但操作复杂，成本高。电热恒温水浴锅：北京医疗设备厂有限责任Flion一酚法(魏华、赵祥颖，2007)依据经典的公司；微量进样器：北京玻璃仪器厂。测定枯草芽孢杆菌的蛋白酶活力方法。此法简单2实验方法易行，可以同时测多个样品，成本低，但需要严2．1平板的制备格控制酶解时间，并

7、且不能完全表示为纤溶酶活力，经实验证明此法测得的蛋白酶活力与纤溶活准确称量10mL1％琼脂糖溶液，置于50mL三角瓶中，放人50c(二水浴中保温，再将10mL纤维蛋力之间存在一定的相关性。目前行业内流行的纳豆激酶检测大致有3种白溶液快速加入琼脂糖中，搅拌均匀，同时加人0．1mL凝血酶溶液，快速混合。混合液在50水方法，其原理、利弊简介如下：(1)琼脂糖一纤维蛋白平板法，以尿激酶为对照，与纳豆激酶样品同浴中加热和保温，待温度平衡后，将其混匀，迅速倒人9cm直径的玻璃培养皿中，室温放置30rain时在纤维蛋白平板特定条件所形成水解圈，测量凝固即成。静置冷