利用Native-PAGE鉴定大豆Lox同工酶-论文.pdf

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1、第31卷第5期大豆科学Vo1．3lNo．52012正lO月S0YBEANSCIENCE0ct．2012利用Native．PAGE鉴定大豆Lox同工酶胡明建，郑文寅，张文明，王晓波，姚大年(安徽农业大学农学院，安徽合肥230036)摘要：以Lox缺失体五星1号、3号、4号和非缺失类型大豆中黄13种子为材料，采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native—PAGE)。通过改变分离胶浓度、电泳电压、样品浓度、电泳时间和染色方法等，探索大豆Lox同工酶电泳最佳条件。结果表明：浓缩胶浓度5％，分离胶浓度13％，

2、浓缩胶电泳电压9OV、分离胶电泳电压190V，样品浓度40％，电泳时间7h，采用pH8．0、pH6．5两种不同的酶染液结合热考马斯亮蓝染色，4种Lox同工酶(Loxl、Lox2、Lox3a和Lox3b)的分辨清晰度最高。该方法简便安全、经济有效，可用于大豆种质资源Lox缺失体的筛选鉴定。关键词：大豆；脂肪氧化酶；非变性聚丙酰胺凝胶电泳；鉴定中图分类号：Q814．1文献标识码：A文章编号：1000-9841(2012)05-0813-04IdentificationofSoybeanLipoxyge

3、naseIsozymebyNative-PAGEHUMing-jian，ZHENGWen-yin，ZHANGWen—ming，WANGXiao—bo，YAODa-nian(CollegeofAgronomy，AnhuiAgrieulturalUniversity，Hefei230036，Anhui，China)Abstract：Therearesomeproblemsexistedinthedetectionofsoybeanlipoxygenase(Lox)isozymessuchascompl

4、exproce·dures，poorresolution，highercostandhighlytoxicreagentsonthehuman，exploringanimprovedmethodstoidentifyLoxisozymeofsoybeanisnecessary．Inthisstudy，Loxdeletionmutants(WuxingNo．1，WuxingNo．3andWuxingNo．4)andnon-deletiontype(ZhonghuangNo．13)wereusedto

5、surveytheoptimalexperimentalconditionforLoxioszymesbychangingtheseparationgelconcentration，electrophoresisvoltage，sampleconcentration，timeandstainingmethodwithNative-PAGE．FromtheresultswefoundthatthefourLoxisoenzymeofsoybean(Loxl，)(2，Lox3aandLox3b)cou

6、ldbeseparatedclearlywhentheconcentrationofstackinggelandseparatinggelwere5％and13％，repectivety；electrophoresisvoltageinstackinggelandsep—arationgelwere90Vand190V，respectively；sampleconcentrationwas40％，andtheelectrophoresistimewas7hours，dyingwithtwodife

7、rentenzymestainingofpH8．0andpH6．5combinedwithheatCoomassiebluestaining．Inshort，itisasimple，safe，economicalandeffectivemethodthatcanbeusedfortheidentificationandscreeningoflipoxygenasedeletionmutantsofsoybeangermplasm．Keywords：Soybeans；Lipoxygenase；Nat

8、ive-PAGE；Identification脂肪氧化酶(Lipoxygenase，简称Lox)是一种含Christopher等¨m“先后从大豆种子中提取了3种脂非血红素铁的水溶性蛋白质，在植物的生长发育、肪氧化酶结晶体，分别定名为Loxl，】【2和Lox3。衰老、受伤反应及抗病原菌、抗虫等过程中起着重随着层析法的不断改进，Lox3又可分离成3a、3b两要作用¨引。自然界中不仅在植物、动物中存在种，不过由于二者在许多性质上的相似，仍被认为Lox，而且在藻类J、面包酵母J、真菌以及氰