大豆不同生长时期基因组DNA提取方法的优化-论文.pdf

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1、中圊患亏c童握2013，29(36)：319—325ChineseAgriculturalScienceBulletin大豆不同生长时期基因组DNA提取方法的优化王月月，范龙，张洁，王冬梅(河北农业大学生命科学学院，河北保定071000)摘要：以探索大豆嫩叶期基因组提取方法为基础，探索从富含酚类、多糖等代谢物质的大豆开花期叶片中获得高质量DNA的提取方法。采用不同的方法提取5种大豆品种在不同生长时期的叶片基因组，并通过对提取的DNA的含量测定、琼脂糖凝胶电泳分析和内参基因的PCR扩增，对不同方法所提取的DNA质量进行综合评价。在嫩叶期，

2、利用前人改进的CTAB法能够分离出纯度高、质量好的DNA，而在开花期，采用本试验新改良的CTAB法可以更有效去除多糖、酚类等物质得到完整性和纯度较好的大豆基因组。前人改进的CTAB法和本试验摸索的新改良CTAB法分别适用于嫩叶期、开花期大豆基因组DNA提取，为大豆的分子生物学研究奠定了基础。关键字：大豆；不同生长时期；DNA提取方法；PCR；多糖中图分类号：Q943．2文献标志码：A论文编号：2013—0490ExtractionMethodOptimizationofSoybeanDNAfromDifferentGrowthPe~od

3、sWangYueyue，FanLong，ZhangJie，WangDongmei(CollegeofLifeScience，AgriculturalUniversityofHebei，BaodingHebei071000)Abstract：TheaimwastoobtainthehighqualityDNAextractionmethodofsoybeanleavesinfloweringstagewhichcontainedpolysaceharidesandpolyphenoliceompounds．ItwasbasedonaDNA

4、extractionmethodwhichwassuitableforsoybeaninfreshleavesperiod．Usingleavesindifferentgrowthperiodsoffivesoybeanvarietiesasexperimentalmaterials，differentgenomicDNAextractionmethodswereconductedandtheconcentrationofgenomeDNAwasdetected．ComprehensiveevaluationoftheDNAqualit

5、yfromdifferentextractionmethodswasconductedbyagaroseelectrophoresisandPCRamplificationofinternalcontrolgene．Theresultsindicatedthat，infreshleavesperiod，DNAextractedwiththemodifiedCTABmethodhadhigherqualityandpurity．However，infloweringstage，mostofpolysaecharidesandpolyphe

6、noliccompoundscouldberemovedmoreefficientlyfromtheDNAextractedbynewmodifiedCTABmethod．TheresultsindicatedthatthenewmethodwassuitableforextractinghighqualifiedDNA．Theresearchesindicatedthatthepredecessors’modifiedCTABmethodandthenewmodifiedCTABmethodconductedinthisstudywe

7、reapplicabletosoybeangenomeDNAextractioninfreshleavesperiodandfloweringstagerespectively．Thisstudylaidafoundationofsoybeanmolecularbioresearch．Keywords：soybean；differentgrowthperiods；DNAextractionmethods；PCR；polysaccharides基金项目：转基因生物新品种培育重大专项子课题“抗逆转基因大豆新品种培育”(2008ZX08004

8、．002—1—5；2011ZX08004．002)；转基因生物新品种培育重大专项子课题“抗旱耐盐转基因大豆新品种培育及种质创新”(2009ZX08004．O01B)；河北省教育厅项目“农杆菌介导的无选择标记