均匀试验设计优化金银花总黄酮的提取

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1、2010年第2期文章编号：1005—3387(2010)02—0028—29均匀试验设计优化金银花总黄酮的提取胡海山朱群英左美玲(1．江西省分析测试研究所，南昌330029；2．南昌市疾病预防控制中心，南昌330006)摘要：本试验采用均匀试验设计法优化金银花中总黄酮提取条件，考查了回流时间、回流温度、提取溶剂乙醇水溶液的比例及提取次数4个因素对金银花中总黄酮提取的影响，以总黄酮的含量为评价指标进行(9)试验，确定最佳提取条件。结果表明，总黄酮提取最佳条件为提取时间1h、提取温度85％、水醇溶剂比例70

2、％、提取次数2次。本研究还进行了超声提取比较实验，为建立的实际工艺的提取方法提供了理论依据。关键词：均匀试验设计；金银花；总黄酮；提取中图分类号：065文献标识码：A醇和乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠为分析纯，0引言自制超纯水。1．2总黄酮的含量测定金银花主要的化学成分包括：有机酸类、黄酮1．2．1标准曲线的制备类、三萜类和挥发油等化合物。金银花中含有黄酮准确称取105℃干燥至恒重的芦丁标准品类化合物：木犀草素一7一葡萄糖甙、槲皮素一3—050mg于50mL容量瓶中，加60％乙醇溶液超声溶一一D一葡萄

3、糖甙、金丝桃苷等。现代医学研究表解，冷却，定容。吸取芦丁标准溶液0mL、0．50mL、明：黄酮类化合物具有降低心肌耗氧量，使冠脉、脑1．OOmL、2．OOmL、3．00mL、4．OOmL(相当于芦丁血管血流量增加，抗心律失常、软化血管、降血糖血0、501．~g、100g、200Ixg、3001．zg、400txg)，移入10mL脂等作用。同时它还是一种天然的抗氧化剂，具有比色管中，加入60％乙醇溶液至5mL，各加5％亚清除人体中超氧离子的自由基，抗衰老，增加机体免硝酸钠溶液0．3mL，摇匀后放置6rai

4、n，加入5％硝疫力的生理活性。酸铝溶液0．3mL，摇匀后放置6rain，加4％氢氧化国内外对黄酮提取方法，可采用热水提取、碱液钠溶液4mL，用60％乙醇定容至刻度。摇匀，放置提取、丙酮提取、微波萃取、乙醇浸提取和超声波提15min，于510nm波长处测定吸光度，以零管为空取等方法¨J，这些方法各具优缺点，可根据实际条白，以芦丁含量(g)为横坐标，以吸光度为纵坐标件进行选择。而在实际工艺中以水提取和醇提取居绘制标准曲线，得回归方程为：A：0．0101C一0．多，且水提取或水醇提取的工艺条件对提取效果影00

5、11，相关系数r=0．9999。响较大，因此，本试验采用(9)均匀试验设计，试1．2．2样品的测定验中选择回流时间、回流温度、提取溶剂乙醇水溶液准确吸取1～5mL提取液，移入10mL比色管中的比例及提取次数4个因素考查对总黄酮提取率的加入60％乙醇溶液至5mL，再按1．2．1项下测定其影响，寻找出金银花中总黄酮较佳的提取工艺条件吸光度，计算得总黄酮含量。参数，建立提取方法简便、可靠，可为生产工艺提供1．2．3总黄酮的提取理论依据。试验中选择回流时间(A)、回流温度(B)、提取溶剂乙醇水溶液的比例(C)及

6、提取次数(D)4l实验部分个因素考查对黄酮提取率的影响，见表1所列。1．1仪器、试剂和样品根据因素水平，按照(9)表均匀设计安排试梅特勒一托利多AL204型电子天平、KQ一验，实验中称取同一样品9份，每回流一次加5200DE型超声波清洗器和721型分光光度计。50mL乙醇水溶液，合并提取液，在回流的水浴中芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所，甲挥干溶剂至约50mL，最后定容至50mL，在用提～28一取液按1．2．2项下进行总黄酮的测定，均匀试验2。2超声试验比较结果见表2。本部分试验中采用超声提取方式与

7、回流提取做实验比较，选用最佳提取参数，即超声提取时间1h、表1因素水平表提取温度80c《=、提取溶剂70％乙醇溶液。超声提因素水平取后测定其总黄酮含量为20．4mg／g，略低于回流A时间(h)l23456提取方式。提取时间大大缩短，产率较高，且设备简B温度(℃)30405060708090100单、操作方便，是提取金银花中黄酮类化合物的一种C比例(％)O204060801oo有效方法。D次数(次)1234表3验证试验安排及结果表2均匀试验安排及结果因素总黄酮含量试验号A(h)B(cC)C(％)D(次)m

8、g／g因素总黄酮含量试验号A(h)口(℃)C(％)D(次)mg／g1l8060222．1114060319．6218070223．2226020l13．2316080221．7338040321．144loo0l12．23结论553020412．3本部分实验探讨了金银花中总黄酮的提取，6650100221．5以总黄酮的含量为评价指标进行U(9)试验，优71700412．8化金银花中总黄酮的最佳提取条件。试验结果表明，金银花中总黄酮提取的最佳