微囊化小鼠白介素-12 基因工程细胞的长效抗肿瘤作用.pdf

《微囊化小鼠白介素-12 基因工程细胞的长效抗肿瘤作用.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、·３４８·ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ２００２Ｏｃｔ；１６（５）：３４８－３５３微囊化小鼠白介素１２基因工程细胞的长效抗肿瘤作用孝作祥，郑树，潘月龙（浙江大学肿瘤研究所，浙江杭州３１０００９）摘要：目的探讨通过微囊化能否获取长效抗肿瘤抗肿瘤免疫反应。其中ＩＬ１２表达的量和时间是重的小鼠白介素１２（ｍＩＬ１２）基因工程细胞。方法构要的影响因素，长期较高浓度地表达ＩＬ１２，可以诱建ｐｃＤＮＡ３．１／ｍＩＬ１２重组表达质粒，然后稳定转染导持久免疫［

2、３］，进而产生强大的抗肿瘤效应。ＣＨＯ细胞，采用海藻酸钠微囊制作技术，将ｍＩＬ１２微囊化细胞（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄｃｅｌｌｓ）技术与基因基因修饰的ＣＨＯ细胞包裹。观察微囊化ｍＩＬ１２基工程的结合可为ＩＬ１２的基因治疗提供一条行之有因工程细胞的ｍＩＬ１２释放，并将微囊化细胞植入荷效的新途径。微囊化细胞是应用海藻酸钠等亲水性瘤小鼠体内，测定小鼠的抗肿瘤免疫功能及抑瘤效高分子材料将细胞包裹所形成的的球囊，当植入在应。结果微囊化ｍＩＬ１２基因工程细胞产生的体内后，囊内细胞可保持存活并防止细胞逸

3、出囊外；ｍＩＬ１２蛋白可自由透过微囊膜。植入荷瘤小鼠体内这一途径可使基因工程细胞产生的重组蛋白长时２１ｄ后，微囊化ｍＩＬ１２基因工程细胞治疗组血清中间、稳定地释放，在体内持续发挥其功能［４］。ｍＩＬ１２，ｍＩＬ２及ｍＩＦＮγ水平分别为（５４９±５３），在本研究中，构建了重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１／（１８０±２９）和（１００８±１５６）ｎｇ·Ｌ－１，而ｍＩＬ４，ｍＩＬ１０水ｍＩＬ１２，稳定转染中国仓鼠卵巢（Ｃｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒ平则显著降低。脾脏细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性ｏｖａｒｙ，

4、ＣＨＯ）细胞，将可持续释放小鼠ＩＬ１２（ｍｕｒｉｎｅ及自然杀伤细胞（ＮＫ）活性均显著增高，肿瘤生长受ＩＬ１２，ｍＩＬ１２）的基因工程细胞进行微囊包裹，植入到显著性抑制，荷瘤小鼠的存活期明显延长。结论荷瘤小鼠体内。观察微囊化ｍＩＬ１２基因工程细胞微囊化ｍＩＬ１２基因工程细胞在体内可持续、稳定地在体产生ｍＩＬ１２的稳定性及其抗肿瘤免疫反应。释放ｍＩＬ１２，能激发机体产生持久而强大的抗肿瘤探讨对实验性肿瘤的治疗效果。免疫反应，对实验小鼠产生明显的抗肿瘤效应并延长其生存期。１材料与方法关键词：细胞微囊化

5、；白介素；基因疗法；肿瘤１．１主要试剂及仪器中图分类号：Ｒ９７９．１ＴＭ转染试剂和Ｇ４１８（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）购自美国Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ文献标识码：ＡＧｉｂｃｏＢＲＬ公司；ＲＰＭＩ１６４０购自Ｈｙｃｌｏｎｅ公司；海藻文章编号：１０００３００２（２００２）０５０３４８０６酸钠（ａｌｇｉｎａｔｅｓｏｄｉｕｍ）、氯化钡（ＢａＣｌ２）及各种孔径的白介素１２（ＩＬ１２）是最具有抗肿瘤应用前景的微滤器均购自美国Ｓｉｇｍａ公司。ｍＩＬ２，ｍＩＬ１２，ｍＩＬ细胞因子之一，但其在Ⅱ期临床实验中却可出现严１４

6、，ｍＩＬ１０和ｍＩＦＮγＥＬＩＳＡ检测试剂盒购自Ｅｎｄｏｇｅｎ重毒副作用［１，２］。近年来ＩＬ１２的基因治疗倍受重公司；细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性检测试剂盒购视。ＩＬ１２基因治疗的关键是能否激发机体持久的自美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司；双腔式微囊发生装置由本所自行研制。收稿日期：２００２０１２８接受日期：２００２０７２２１．２动物及细胞株作者简介：孝作祥（１９６４－），男，山东省新太市人，主ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，♂，６～８周，购自上海西普尔必治医师、讲师，在读博士研究生，主要从事肿瘤化疗、基因凯动

7、物有限公司；结肠腺癌细胞株ＣＴ２６细胞及及生物治疗的临床和基础研究工作；郑树（１９３１－），ＹＡＣ１细胞由浙江大学免疫研究所提供；ＣＨＯ细胞女，浙江省杭州市人，浙江大学医学院肿瘤学教授，博士生导由本所常规传代培养。师。联系作者Ｔｅｌ：（０５７１）８７２１４４０４，Ｆａｘ：（０５７１）８７２１４４０４，１．３质粒构建Ｅｍａｉｌ：Ｚｈｅｎｇｓｈｕ＠ｍａｉｌ．ｈｚ．ｚｊ．ｃｎ按文献［５］构建具有生物学活性的ｍＩＬ１２双亚中国药理学与毒理学杂志２００２年１０月；１６（５）·３４９·基ｐｃＤＮＡ３．１／ｍＩＬ

8、１２表达质粒。细胞，效／靶比为２０∶１。ＮＫ及ＣＴＬ活性如下式计１．４ｐｃＤＮＡ３．１／ｍＩＬ１２表达质粒转染ＣＨＯ细胞算：及ｍＩＬ１２释放水平测定杀伤活性（％）＝（实验孔ｃｐｍ－自然释放孔ｃｐｍ）／（最大用转染试剂ＳｕｐｅｒＦｅｃｔＴＭ将ｐｃＤＮＡ３．１／ｍＩＬ１２表释放孔ｃｐｍ－自然释放孔ｃｐｍ）×１００％达质粒转入ＣＨＯ细胞（按说明书操作），药物Ｇ４１８１．８小鼠血液中细胞因子的检测进行