随访队列代谢酶基因多态性与结直肠癌关系的病例对照研.pdf

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1、第二届全国分子流行病学学术会议(论文集)2004·长春随访队列代谢酶基因多态性与结直肠癌关系的病例．对照研究陈坤1金明娟1范春红1宋亮1蒋沁婷1俞维萍1马新源2姚开颜2(1．浙江大学公共卫生学院，浙江杭州31003l；2．浙江省嘉善县肿瘤防治所1【摘要】目的：以自然人群为研究对象，探讨I、Ⅱ相代谢酶基因多态性与结直肠癌的发病关系．方法：采用PCR为基础的分析技术，对140例结直肠癌病例和343例对照的代谢酶基因型进行了检测分析．结果：采用单基因多态分析、同酶系基因多态联合分析以及I、Ⅱ相代谢酶基因多态联合分析，仅在CYPlAlm2／m

2、2纯合基因型、cYPlAlm2多态等位基因同时携带cYPlA2734A多态以及GsTM1缺陷型伴GsTTl缺陷型观察到了显著效应，OR．(95％CI)依次为0．49(0．25~o．95)、0．53(O．34~o．82)和3．48(1．17～lO．39)．结论：CⅥ’lAlITl2多态、CYPlA2734A多态可能降低湖．体结直肠癌的易感性，GsTM1缺陷型、GSTT1缺陷型则可能使机体罹患结直肠癌的风险增高。【关键词】结直肠肿瘤；细胞色素P450；谷胱甘肽S．转移酶；N．乙酰化转移酶；多态性结直肠癌(colorectaJcancer’

3、CRC)是消化道常见的恶性肿瘤之一，WHO报告，2000年世界范围内约有945，000例CRC新病例发生，约有492，400个体死于该疾病【l】。在我国，每年大约有140，000人新患CRC，占全部癌症患者的6．8％，死亡率为3．54／10万，占癌症死亡率的5．29％，居第六位【2】oCI℃的发生是多因素、多步骤的作用过程，以往有关代谢酶基因多态性、环境暴露因素与结直肠癌的关系己开展了广泛研究，本研究拟在以往研究的基础上，以自然随访人群为研究对象，探讨I相代谢酶CYPlAl、CYPlA2、CYP2E1以及Ⅱ相代谢酶GSTTl、GS刑1

4、、GSTPl、NATl、NAT2基因多态性与结直肠癌的关系，以系统阐明代谢酶基因多态性与机体结直肠癌遗传易感性的关系。1．材料与方法1．1研究对象研究的目标人群为1989年5月～1990年4月在浙江省嘉善县建立的结直肠癌自然人群随访队列，该人群有完整的肿瘤登记、报告、监测系统，同时该县是全国县级单位结直肠癌调整死亡率最高的县份。研究病例为1990年5月～2002年5月间发生原发性结直肠癌并曾参加1989～1990年间的结直肠癌筛检的存活病例，共调查140例(结肠癌57例，直肠癌83例)：对照选取采用单纯随机抽样方法从随访队列中抽取40

5、0人，实际调查343人；研究对象共483例均由统一培训的调查员上门进行问卷调查，同时抽取静脉血5ml。1．2研究方法基因组DNA提取：采用改良盐析法抽提全血基因组DNA【31。所有基因多态分析均采用聚合酶链反应(PCR)为基础的检测分型方法。。1．2．1CYPlAl基因MspI多态分析采用PCR．限制性片段长度多态性(PcR．RFLP)分析，引物序列为5’CAG]rG从GAGGTGTAGCCGCT．3’和5’．TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT．3’。PCR反应条件为94℃预变性5mm后，·于95℃30s、59℃30s和72℃

6、40s进行30个循环后，72℃延伸lOmin。PCR目的产物为340bp片段，若存在MspI多态位点(1112)，酶切为140、200bpDNA片段。1．2．2CYPlA2基因C734A多态分析采用PcR-RFLP分析方法，引物序列为5’．CCCAGAAGTGGAAACTGAGA．3’和5’．GGGTrGAGAJ啪AGACATTC．3’。PcR反应条件为94℃预变性5min后，于95℃30s、52℃30s和72℃30s进行32个循环后，72℃延伸7miIl。PCR目的产物为243bp片段，经ApaI酶切，734C酶切为119、124b

7、pDNA片段，734A不存在酶切位点。1．2．3CYP2E1基因PstI(．1259G—C)和RsaI—lO—第二届全国分子流行病学学术会议(论文集)2004·长春(．1019c—T)多态分析采用PcR．RFLP分析方法，引物序列为5’．CCAGTCGAGTCrI’AcATTGTCA一3’和5’．TTCATTCTGTCTrCl：八ACTGG．3’。PCR反应条件为94℃预变性5min后，于95℃30s、56℃30s和72℃60s进行30个循环后，72℃延伸7min，PCR目的产物为410bp片段。PCR产物分别用PstI和RsaI酶切

8、，一1259C经PstI酶切为290、120bp【)NA片段，一1019C经RsaI酶切为360、50bpDNA片段。1．2．4GsTMl和GSTT1基因多态分析采用多重等位基因特异一PcR分析方法，同时扩增GSTMl，