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1、XX大学毕业论文苏拉明对体外培养视网膜色素上皮细胞壇殖的影响2014年6月25日苏拉明对体外培养视网膜色素上皮细胞增殖的影响作者：康军惠延年徉•志利韩泉洪【关键词】细胞培养关键词：色索上皮，眼;细胞培养;增殖;苏拉明;四甲基偶氮卩坐盐比色法;细胞分裂指数;AgNORs染色摘要:H的研究苏拉明(suramin)对培养人视网膜色素上皮细胞(retinalpigmentepithelium,RPE)增殖的影响.方法将不同质量浓度的苏拉明(1.5,15和150mgL-l)加入RPE细胞培养液，采用四甲基偶氮卩坐盐(tetrazolium,MTT)比色法
2、，细胞分裂指数计数和核仁组成区嗜银染色(AgNORs)检测苏拉明对RPE增殖活力的影响.结果含有1OOmLL-1小牛血清的培养液可以显著刺激RPE的增殖(P0.01)，无血清组A值为0.19±0.01、含血清组A值为0.30±0.01;苏拉明抑制了1OOmLL-1血清条件下RPE的增殖，呈剂量依赖性，最大抑制率达51%,3种浓度组A值分别为0.29土0.01,0.24±0.01和0.14±0.01,对细胞的形态无明显影响.结论苏拉明对血清刺激RPE增殖有显著非毒性抑制作用.Kcyvords:pigmcntepitheliumofcyc;ccl
3、lculturc;prolifcra-tion;suramin;MTT;cclldivisionindcx;Ag-NORsAbstract:AIMToinvestigatetheeffectsofsuraminonpro-liferationofculturedhumanretinalpigmentepithelial(RPE)cellsinvitro.METHODSTheculturedhumanRPEcellswereaddedwithsuramin(1.5,15,150mgL-l).Tetra-zoliumcolormetricassay
4、(MTT),celldivisionindexandAgNORsstainingwereperformedtoexaminethecellsviabili-tyofproliferation.RESULTSTheserumstimulatedRPEproliferationsignificantly(P0.01).Theserum-inducedproliferationwaseffectivelyinhibitedbysuramininadose-dependentmanner.Themaximalinhibitionratewasabout
5、51%.TheAvaluewas0」9±0.01and0.30±0.01innon-scrumgroupandscrumgrouprespectively,andwas0.29±0.01,0.24±0.01,andO.14±0.01attheconcentrationsofl.5,15,andl50mgL-lsuraminrcspcctivcIy.Noabnor-malcellularmorphologywasobserved.CONCLUSIONTheserum-inducedproliferationofRPEcanbeinhibitedb
6、ysuramin.0引言增殖性玻璃体视网膜病变(proliferativevitrco-rctinopathy,PVR)是一种眼内细胞过度增生的病变，视网膜色素上皮细胞(retinalpigmentepitheli-um,RPE)是PVR屮主要的增牛细胞，因此，寻找有效的辅助药物，抑制RPE的增殖活性，对防止和降低PVR的发生具有重要的临床意义•我们用含有多种促生长物质的小牛血清作为促增殖因素，观察生长因子扌吉抗剂苏拉明在不同浓度时对RPE增殖的影响.1材料和方法1」材料人源第3代RPE4种作为实验细胞，由本院王雨生副教授惠赠.Dclbccco
7、改良的Eagle培养基(Dclbcccon'smodifiedEagle'smedium,DMEM)干粉(Gibeo产詁)、朕蛋白酶(Difeo产甜)、新生小牛血清(四季青产甜)、苏拉明(suramin)(Alexis,Cornerstone,USA)＞四甲基偶氮卩坐盐(美国Sigma公司)、二甲基亚矶(DMSO,上海化学制品厂)、硝酸银(河南焦作市化工三厂)、96孔细胞培养板(NUNC,Denmark).1.2方法复苏RPE细胞，用含50mLL-l血清的DMEM培养液稀释，37°C,50mLLlC02孵箱静置培养，次日换液.细胞接近铺满吋传代
8、，选4〜7代细胞用于实验•实验分空白对照组、对照组及实验组3组•空白对照组为无血清DMEM,对照组为含100mLL-l血清的DMEM,实验组为含有苏拉
