不同光照时长对体外培养人视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡的影响.pdf

《不同光照时长对体外培养人视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡的影响.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第36卷6期宁夏医科大学学报2014年6月JournalofNingxiaMedicalUniversity·625·文章编号：1674—6309(2014)06—0625—03·论著·不同光照时长对体外培养人视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡的影响宋超，俞洋(宁夏医科大学中医学院，银川750004)摘要：目的研究不同光照时长对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(hRPE)凋亡的影响，筛选出最佳建造光损伤模型的光照时长，为后续研究视网膜光损伤机制及光损伤保护提供必要的实验基础。方法体外培养人视网膜色素上皮细胞(hRPE)，用三基色冷光灯模拟自然光源，

2、选取(25004-500)Lux作为基础光照强度，以不同光照时长(2、4、6h)对细胞进行照射。建立光损伤模型。分别采用MTS法和流式细胞术检测细胞活力及早期凋亡率，比较给予不同光照时长后，hRPE的活力及早期凋亡率的差异。结果与空白对照组比较，不同光照时长(2、4、6h)均能抑制细胞活力及引起细胞凋亡；光照时间越长，细胞损伤越严重，光照6h组细胞活力下降明显(P<0．05)；光照组细胞早期凋亡率较空白对照组升高(P<0．05)，光照组间比较，光照4h组早期凋亡率升高明显(P<0．05)。结论不同光照时长均可造成hRPE不同程度的损害；给予

3、4h时长光照后，hRPE损伤以早期凋亡为主，同时又保有较高的细胞活力，故选取4h作为最佳建造光损伤模型的光照时长。关键词：光损伤；人视网膜色素上皮细胞；早期凋亡率中图分类号：R774．1文献标识码：A随着社会发展和人民生活水平的日益提高，1．2仪器与设备CKX31组倒置相差显微镜人们在学习、工作和生活中与可见光接触的时间(OLYMPUS)；TES一1330A数位式照度计(台北泰越来越长，视网膜光损伤问题也随之加重，如眼科仕电子工业)；SW—CJ一1FD单人单面净化工作台常见病——年龄相关性黄斑变性(age—related(苏州净化设备有限公

4、司)；恒温CO细胞培养箱maculardegeneration，AMD))，其发病就与视网膜(美国ThermoScientific公司)；Smartspee3000型酶光损伤有相似的病理过程，因此研究可见光对视联免疫检测仪(美国Bio—Rad公司)；TDL一40B网膜色素上皮细胞(hRPE)的损伤作用有重要意台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；自制直落式义。本文通过研究不同光照时长对体外培养LED灯；流式细胞仪(BDFACSCalibur)；CKX41自hRPE的损伤影响，筛选最佳建造光损伤模型的动显微照相装置(OLYMPUS)。光照时长，为

5、后续研究视网膜光损伤机制及光损1．3方法伤保护提供必要的实验基础。1．3．1hRPE细胞的复苏、鉴定及培养1材料和方法复苏：将冻存的hRPE在37℃水浴轻轻摇动1．1材料及试剂人视网膜色素上皮细胞株使其迅速解冻，75％酒精擦拭后无菌操作台上将(ARPE一19)CCTCC(编号GDC0323)，购于武汉细胞悬液吸人离心管内，再加入lOmL10％完全大学中国典型培养物保藏中心；HyCloneDMEM／DMEM／F12培养液(含体积分数10％的FBS的混F12(1：1)细胞培养液；胎牛血清(FBS)购于杭州合液)，混匀后低速离心(800r·min

6、)5min，弃四季青；胰酶消化液(不含EDTA)购于上海所来去上清液，经细胞计数，调整细胞浓度为(2×宝生物有限公司；鼠抗人角蛋白单克隆抗体免疫10)·mL接种于25cm细胞培养瓶中，次日换组化试剂盒购于博士德公司；MTS细胞增殖与毒液，观察细胞生长状况。性检测试剂盒、AnnexinV—FITC细胞凋亡检测试鉴定：复苏后的细胞接种于消毒盖玻片，用鼠剂盒购=上海贝博生物有限公司。抗人细胞角蛋白单克隆抗体做免疫组化染色。步骤如下：①甲醇和冰丙酮溶液(浓度1：1)固定；②收稿日期：2014—01—06加入1：100稀释的鼠抗人角蛋白单克隆抗体基金

7、项目：国家自然科学基金(61360557)(CK)，鼠抗人SIO0抗体，4℃过夜；③用PBS液洗作者简介：宋超(1987一)，女，在读硕士研究生，主要从事中医药对3次。加入二抗羊抗鼠IgG，湿盒37℃孵育1h；④眼底病的防治研究。通信作者：俞洋(1973一)，男，副教授，硕士研究生导师。DAB显色，苏木素复染，镜检。RPE细胞胞浆呈E—mail：yaon999@126．corn棕黄色着色为阳性。·626·宁夏医科大学学报36卷培养：将复苏的hRPE置于5％的CO，、95％的2．2不同光照时长对hRPE细胞活力的影响空气，湿度为90％的37℃

8、的培养箱中培养，每2dMTS法检测结果显示，hRPE活力率组间比较差换液1次，待倒置显微镜下见细胞铺满细胞瓶壁约异有统计学意义(F=16．075，P=0．000)。与空80％一9