三氧化二砷对视网膜色素上皮细胞增殖、移行和凋亡的影响

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1、温州医学院硕士学位论文三氧化二砷对视网膜色素上皮细胞增殖、移行和凋亡的影响姓名：张少波申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：宋宗明2012-05-18温州医学院硕士学位论文中文摘要目的：探讨三氧4L二石申(arsenictrioxide，As203)聂J"表皮-K：[]z子(epidermalgrowthfactor，EGF)诱导的视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium，RPE)细胞增殖和迁移的影响，及其对RPE细胞凋亡的影响以及可能的作用机制。方法：将药物终浓度为0、O．5

2、、1．0、2．0、5．0、10．0和20．0¨mol／L的As203分别加入到无血清、含10ng／mlEGF和10％血清培养的ARPE．19细胞培养液中，培养24h和48h，通过MTT比色法检测药物对ARPE．19细胞活性的影响，从而观察As203对ARPE．19细胞的药物毒性作用，对EGF诱导的ARPE．19细胞增殖的影响，对10％血清培养下的ARPE．19细胞活性的影响，筛选安全、有效的药物浓度；通过划痕和Transwell实验检测As203对EGF诱导的ARPE．19细胞迁移的影响；通过Hoech

3、st33342和TUNEL实验检测As203诱导ARPE．19细胞凋亡的作用；采用荧光染料H2DCF—DA和荧光探针JC．1分别检测As203作用于ARPE．19细胞12h后细胞内活性氧和线粒体跨膜电位的变化情况。结果：MTT检测发现：在作用24h和48h后，通过与对照组的OD值进行比较，0．5～5．0“mol／LAs203对ARPE一19细胞活性无明显的影响(24h：F=0．858，P=0．521>0．05；48h：F=0．720，P=0．598>0．05)。同时0．5~2．Ol上mol／LAs20s

4、对lOng／mlEGF诱导的ARPE．19细胞增殖亦无明显影响(24h：F=I．380，P=0．317>0．05；48h：F=1．030，P=0．429>0．05)，而5．0-20．0}tmol／LAs203对EGF诱导的ARPE．19细胞增殖具有明显的抑制作用。5．09rnol／LAs203对血清培养的ARPE．19细胞作用24h后，细胞活性开始表现出明显的下降，其降低了33％。而作用48h后，细胞活性下降了48％。划痕实验的结果显示：0．5~2．0pmol／LAs203对lOng／mlEGF诱导的A

5、RPE．19细胞横向迁移具有抑制作用。Transwell的实验结果表明O．5～2．01amol／LAs203对10ng／mlEGF诱导的ARPE．19细胞纵向迁移有明显的抑制作用，其抑制率分别为22％、33％和46％。Hoechst33342检测发现As203作用血清培养的ARPE一19细胞24h后，部分细胞出现核浓缩，产生凋亡小体等形态学变化，而未加药组细胞无明显变化。TUNEL法显示无血清且未加药组ARPE．19细胞呈现绿色荧光的阳性率为(2．90士0．28)％，含血清但未加药组为(3．97士0．2

6、1)％，含血清且加药组为(33．26士3．96)％，加药组与未加药组比较有统计学意义(★P<0．01)。5．01．tmol／LAs203对血清培养的ARPE一19细胞作用12h后，细胞内ROS含量增加，线粒体跨膜电位降低。6温州医学院硕士学位论文结论：As203能够显著抑制EGF诱导的ARPE．19细胞增殖和迁移，并能通过线粒体凋亡途径诱导血清培养的ARPE．19细胞发生凋亡。关键词：三氧化二砷；视网膜色素上皮细胞；表皮生长因子；细胞增殖：细胞迁移；细胞凋亡温州医学院硕士学位论文Abstractobje

7、ctiveToexploretheeffectofarsenictrioxide(As203)onEGF—inducedproliferationandmigrationofretinalpigmentepithelium(RPE)cell，andthepotentialmechanismofAs203inducedRPEcellapoptosis．MethodsDifferentconcentrationsofAs203(0，O．5，1．0，2．0，5．0，10．0，20．0pmol／L)wereus

8、edtotreatARPE-19cellwithorwithout10ng／mlEGFinserum-freegroup，andARPE一19cellculturedin10％fetalbovineserum(FBS)for24hand48h，respectively．TheMTTcolorimetricassaywasusedtocheckcellulartoxicityofAs203，analyzetheeffectsofAs203on