高压氧对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的研究

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1、隶南y大◆粤临床医学硕士学位论文万方数据高压氧对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的研究专业名称：眼科学研究生姓名：李佳霖导师姓名：栾洁万方数据TheoxidativeeffectofHyperbaricOxygenTherapyonHumanretinalpigmentepitheliumcellsADissertationSubmiRedtoSoutheastUniversityForAcademicMasterofMedicalScienceBYLIJia-linSupervisedbyProf．LU久NJieMedicalCollegeofSoutheastUniversi

2、tyMay2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在

3、保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：导师签名：如日期：伽。垆．t．乡口万方数据中文摘要高压氧对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的研究研究生：李佳霖导师：栾洁东南大学临床医学院【目的】通过体外培养人视网膜色素上皮细胞，观察高压氧(hyperbaricoxygen，rmo)治疗对正常和缺氧状态视网膜色素上皮fretiIlaJpigmentepithelium，RPE)细胞的细胞活性、线粒体DNA氧化损伤标记物8一羟基鸟嘌呤(8一Hy—droxydeoxyguanosine，8

4、-OHdG)及DNA氧化损伤修复标记物8．羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(human8-OHdGuanineDNAglycosylasel，hOG01)表达的影响。【方法】体外培养人视网膜色素上皮细胞ARPE．19，随机分成对照组(正常对照组用DMEM／F12培养液，缺氧对照组用含浓度为2009mogLCoCl2的DMEM／F12培养液)和实验组(0．15MPa高压氧处理组，0．2MPa高压氧处理组，0．25MPa高压氧处理组，缺氧+0．15MPa高压氧处理组，缺氧+0．2MPa高压氧处理组，缺氧+0．25MPa高压氧处理组)。各实验组在100％纯氧下暴露60和90min，每隔24h

5、暴露一次，共暴露2次。以3．(4，5．二甲基噻唑一2)一2，5一二苯基四氮唑溴盐(3-(4，5-Dimethylthiazol一2一y1)一2，5一diphenyltetrazoliumbromide，MTT)法检测各组视网膜色素上皮细胞的增生活力；以免疫细胞化学(immunocytochemistry，ICC)方法检测细胞内8-OHdG的表达情况，以蛋白免疫印迹法(WesternBlot)检测胞浆中hOGGl的表达情况。【结果】1．MTT法显示：①正常状态的人RPE细胞，与正常对照组相比，HBO干预0．15MPa组、0．20MPa组、0．25MPa组在所有观察时间(60mi

6、n、90min)，RPE细胞的增殖活力均受至lJ(P

7、着时间延长呈增加的趋势；②缺氧状态的人RPE细胞，与缺氧对照组相比，HBO干预0．15MPa组、0．20MPa组、0．25MPa组在所有观察时间(60min、90min)，细胞内8-OHdG表达量明显减少(P<0．01)；0．20MPa组与0．25MPa组相比，细胞内8-OHdG表达量差异没有统计学意义(P>O．05)；各组8-OHdG表达量均随着时间延长呈减少的趋势。③与正常对照组相比，缺氧对照组细胞内8-OHdG表达量明显增加(P<0．01)。3．WesternBlot法显示：①正常状态的人RPE细