微波辐射对培养的人视网膜色素上皮细胞基因转录的影响论文

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1、微波辐射对培养的人视网膜色素上皮细胞基因转录的影响论文.freelRNA进行检测.结果在101条有关应激和凋亡的目的基因中发现有3条基因转录增加，有2条基因转录降低.结论微波辐射可引起细胞中与应激和凋亡有关的基因中多基因的改变.KeyicroicroicroarrayR-NAfromhTERT-RPE1cellsandthecellsradiatedbymic-roongthe101aimgenes，thereRNA分别标记成2种探针，将探针混合后与基因芯片进行杂交、洗涤.freelLL-1胎牛血清的DF12培养液中，37℃，50mLL-1CO2中培养.培养的hTERT-RPE1细胞在10mH

2、z的微波下辐射1h，同时连续纪录培养瓶中培养液的温度.分别收集10midiKit纯化得mRNA.按说明书操作与电泳检测.1.4核酸标记参照Schena等［1］方法逆转录标记cDNA.Cy5-dUTP标记正常培养的hTERT-RPE1细胞提取的RNA，Cy3-dUTP标记10mHz微波下辐射1h，连续纪录培养瓶中培养液的温度（记算每10min的平均温度），细胞培养液温度变化见Fig2.2.3芯片杂交差异结果标记基因Cy3和Cy5信号值两者皆必须大于200，或Cy3和Cy5信号值其中之一必须大于800的基因称为有效基因，101个目的基因中有88个为有效基因.按阳性标准，从88个有效目的基因中筛选出

3、差异转录基因共5条，约占5%.其中10m31166，L24123，AF039704基因;而与细胞代谢应激有关基因U49869（编码Ubiquitin蛋白，一种重要的非溶酶体蛋白水解酶）和与细胞增殖有关的基因AF098799（编码核转运子RanBP7）转录降低.在本试验条件下未检测到与细胞凋亡和与细胞热应激主要相关的基因转录有显著的差异.M31166编码的TSG-14是一种TNF/IL-1可诱导的pentraxin家族成员［2］，为Mr42×103分泌型糖蛋白，与急性期蛋白如C反应蛋白、血清淀粉样蛋白在C末端有50%的同源性.细胞TSG-14表达增加可为处于应激状态的细胞提供能量，表现为葡萄糖摄

4、入增加，脂肪蛋白质分解增加，细胞蛋白质合成减少.图1微波辐射与未辐射细胞70℃1h与-20℃1h后总RNA电泳图略图2微波辐射与未辐射细胞培养液温度变化略表1微波辐射较未辐射细胞转录差异的基因略基因L24123编码一种核蛋白Nrf1［3］，Nrf和c-jun杂合体结合到γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶、谷胱甘肽S转移酶、NAD（P）-醌，氧化还原酶等基因启动子的抗氧化反应元件上（ARE），调节它们的表达.这些酶参与细胞应激与解毒，核蛋白Nrf和c-jun表达增加可显著上调这些酶的转录，从而增加细胞的抗应激能力.由基因AF039704编码的蛋白质是一种对pepstatin不敏感的酸性蛋白酶（CLN2）［

5、4］，位于各种细胞的溶酶体中.当细胞处于应激状态时产生大量的自由基，可引起蛋白质变性、交联、酶失活等;这些变性失活的蛋白质被运送到溶酶体中由酸性蛋白酶（包括CLN2）分解.CLN2蛋白质缺乏或活性不足可导致一种渐进性、致命性的神经退行性疾病（neuronalceroidlipofuscinosis，LINCL）的发生［5］.微波辐射较未辐射细胞转录降低的基因有U49869，该基因编码Ubiquitin蛋白，Ubiquitin蛋白在细胞代谢应激后转录表达［6］，是细胞内非溶酶体蛋白水解酶系统中最重要的酶之一，细胞代谢水平与Ubiquitin表达强度有关.另一个转录降低的基因AF098799编码i

6、mportin7（RanBP7）蛋白，importin7蛋白是公认的与组蛋白和核糖体蛋白质核内转运有关的关键性核转运受体，与细胞周期的递进和细胞增殖有关［7］，与细胞增殖有关的importin7蛋白表达降低，表现为细胞的生长暂时受抑.3讨论基因芯片是近几年发展起来的一项前沿生物技术，它在一次实验中可以对上万种基因的转录或表达水平进行快速、准确、高效的检测.微波辐射可引起培养细胞的氧化应激反应，诱导细胞损伤或凋亡［8］.细胞的氧化应激和凋亡反应涉及到细胞内多基因的参与，传统的研究方法仅仅从一个基因、一个蛋白入手研究其作用，所获得的信息往往比较单一，很难对微波的作用机制有一个全面的了解.通过用基因

7、芯片技术对微波辐射组细胞与正常组细胞在细胞应激和凋亡基因转录水平进行比较研究，可以发现与微波辐射应激反应有关的基因群，探讨微波辐射作用的分子机制，为进一步深入研究微波的生物学效应和预防提供线索.微波辐射是一种由空间向生物体作用的交变电磁场，因生物体内含有导电程度不等的各种电解质、极性分子，以及非极性分子被极化成的偶极子等，它们随交变电场方向的变动而旋转，可与周围粒子发生碰撞、摩擦;这种取向运动使偶