硅油小滴对人视网膜色素上皮细胞吞噬活性的影响论文

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1、硅油小滴对人视网膜色素上皮细胞吞噬活性的影响论文马丽娜惠延年王雨生张乐王静波徐建峰马吉献【摘要】目的：探讨一定大小的乳化硅油小滴能否影响视网膜色素上皮（retinalpigmentepithelial,RPE）细胞的吞噬能力。方法：将硅油挤压通过一种微孔滤膜制成大小相似的小滴。用酞箐蓝标记硅油小滴。培养的人RPE细胞与硅油小滴，伴或不伴有血清，共同孵育24h。被细胞内吞的小滴在显微镜下计数。测量人RPE细胞在体外吞噬硅油小滴的数量。结果：挤压通过这种微孔膜制成的硅油小滴至少稳定5d，硅油小滴的直径为4.25

2、±0.77μm。乳化硅油浓度不同，RPE细胞吞噬硅油小滴的数量有明显剂量依赖性，随浓度增高，吞噬数量也增加。加有血清的硅油小滴使RPE细胞的吞噬能力进一步增强。结论：硅油小滴能刺激RPE细胞的吞噬能力，含有血清时对RPE细胞的吞噬能力有进一步的刺激作用。【关键词】色素上皮眼硅油乳化吞噬EffectsofvesiclesofsiliconeoilonphagocytosisofhumanretinalpigmentepithelialcellsinvitroAbstractAIM:Toinvestigatee

3、ntepithelial(RPE)cellscanbeinfluencedbyemulsifiedsiliconeoildropletsilarlysizedvesiclesofsiliconeoilicro-porefiltermembrane.VesiclesofsiliconeoilonitoredanRPEcellsfor24hours.ThenumbersofthevesiclesengulfedintheRPEcellsicroscope.Themainoutemeasurebersofsili

4、coneoilinvitro.RESULTS:Extrudingsiliconeoilthroughthemembraneresultedintheproductionofvesiclesthatremainedstableforatleast5days.Themeanvesiclediameter.Vesiclesofsiliconeoilhadadose-dependentinfluenceonRPEcellphagocytosis.Themoretheconcentrationofthevesicle

5、s,themorephagocytosisthecellsdid.PhagocytosisofthevesiclesbyculturedRPEcellsulatedbyserumaddedintheculturemedium.CONCLUSION:Theseinvitrodatashoulsified.VesiclesofsiliconeoilcanstimulatetheabilityofRPEcellphagocytosis.Theserumcanfurtherstimulatetheabilityof

6、thephagocytosis.·KEYEM,Gibco,USA)中加入100mL/L新生牛血清（四季青产品）、青霉素（100×103U/L）、链霉素（100×103U/L），培养箱中37℃，50mL/LCO2常规培养，次日更换培养液继续培养。选择3～6代细胞用于实验。将对数生长期的细胞按5×108个/mL密度接种于预置有盖玻片（8mm×8mm）的24孔板中，接种24h后更换培养液，每孔加入2mL培养液。实验分两组，第1组加入DMEM培养液，第2组加入加有100mL/L新生牛血清的DMEM培养液。分别向2组

7、细胞中加入硅油含量为0（10mmol/LPBS液，空白对照），12.5,25.0,50.0mL/L的染色乳化硅油液100μL，常规培养24h，取出爬片，10mmol/LPBS液充分冲洗3次，40g/L多聚甲醛固定0.5h，用吸管吸取多聚甲醛轻轻冲洗爬片上残留硅油小滴3次，10mmol/LPBS液漂洗3次，待测。光学显微镜下观察，每张爬片随机取3个视野，每个视野至少计数50个细胞，用图象采集分析系统(Image－ProPlus6.0)计算细胞内吞的染色硅油小滴来分析RPE细胞对硅油小滴的吞噬作用。每个浓度设3

8、个复孔，重复实验3次。统计学处理：采用数据软件SPSS11.5处理，采用t检验，进行两样本均数比较，以及LSD检验，进行多组样本均数比较，数据表示为。2结果用孔径为0.45μm的微孔膜制得的硅油小滴直径为4.25±0.77μm，硅油小滴可稳定至少5d。酞箐蓝可均匀着染硅油小滴，不溶于PBS，可示踪硅油小滴，分析RPE细胞内吞硅油小滴的情况。培养的RPE细胞固定于玻璃面上，在DMEM组与加有100mL/L新生牛血清