葛根素对人视网膜色素上皮细胞增殖及DNA合成的影响.doc

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1、葛根素对人视网膜色素上皮细胞增殖及DNA合成的影响作者：李雯霖　姜德咏　陈忠平　张莉【摘要】　　目的：葛根素对人视网膜色素上皮细胞增殖及DNA合成的影响。方法：酶消化法分离人RPE细胞，进行形态学观察并用免疫组织化学法做抗人角蛋白抗体鉴定，取3～8代细胞用于实验。细胞计数法检测不同浓度（0，0.01，0.1，1g/L）葛根素作用24h和0.1g/L葛根素在不同时间（24，36，48，72h）对人RPE细胞增殖活性的影响，并计算出相应的细胞增殖抑制率。四唑盐（MTT）比色法检测葛根素作用24h对人RPE细胞增殖活性的影响。用3H胸腺嘧啶核苷（3Hthymidine，3H-TdR）

2、掺入法检测葛根素作用24h对人RPE细胞DNA合成的影响。结果：葛根素以剂量和时间依赖方式抑制人RPE细胞增殖，经统计学分析，0.01g/L以上浓度葛根素均能显著抑制人RPE细胞增殖(P＜0.01)及DNA合成(P＜0.01)。结论：葛根素显著抑制人RPE细胞增殖及DNA合成。【关键词】葛根素　药理学　视网膜色素上皮细胞　增殖　　EffectofpuerarinonproliferationandDNAsynthesisofhumanretinalpigmentepithelialcellsAbstractAIM:Toinvestigatetheeffectofpuerarin

3、onproliferationandDNAsynthesisofhumanretinalpigmentepithelial(RPE)cells.METHODS:HumanRPEcellswereculturedbyenzymaticdissociationmethods,thepurityofculturedhumanRPEcellswereassessedmorphologicallyandconfirmedbyimmunohistochemicalstainingforhumancytokeratin,subculturesbetween3and8(P3-8)wereuse

4、dinthestudy.CountingcellnumberswasusedtodeterminetheeffectofpuerarinonthegrowthofhumanRPEcellsatdifferentconcentration(0,0.01,0.1,1g/L)andfordifferenttime（24，36，48，72hours）.ThearrestrateofhumanRPEcellproliferationbypuerarinwasdetermined.Thetetrazoliumdye-reductionassay(MTT)wasusedtodetermine

5、theeffectofpuerarinonhumanRPEcellsurviralandproliferationfor24hoursatfourconcentrations.The[3H]thymidineincorporatingwasusedtodeterminetheeffectofpuerarinontheDNAsynthesisofhumanRPEcellsfor24hoursatfourconcentrations.RESULTS:PuerarininhibitedproliferationofhumanRPEcellsinadoseandtime-depende

6、ntmannerinvitro.TheinhibitoryeffectontheproliferationandDNAsynthesisofhumanRPEcellswasstatisticallysignificantatconcentrationsabove0.01g/L(P<0.01).CONCLUSION:Puerarincansignificantlyinhibitthe4proliferationandDNAsynthesisofhumanRPEcells..·KEYWORDS:puerarin;pharmacology;retinalpigmentepith

7、elialcell;proliferation　　0引言增生性玻璃体视网膜病变（proliferativevitreoretinopathy,PVR）是一种常见的致盲眼病，细胞增殖是PVR的病理特征。视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞是参与PVR中视网膜前膜（epiretinalmembranes,ERM）的主要细胞成分。葛根素具有扩血管、促进血液循环、改善微循环等主要作用，已广泛用于临床，但有关葛根素的细胞作用研究报道不多。我们观察葛根素对人RP