医学毕业论文培养不同时间大鼠皮质在缺糖缺氧损伤中神经元凋亡的观察.doc

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1、XX大学毕业论文2014年6月25日培养不同时间大鼠皮质在缺糖缺氧损伤中神经元凋亡的观察【摘要】忖的观察培养不同吋间的大鼠脑皮质神经冗对缺糖缺氧的敏感程度，探讨培养时间在皮质神经元损伤中的作用。方法首先分离孕18天胎鼠的皮质神经元，分为对照组和实验组。实验组于培养6天、8天、12天时分别进行缺糖缺氧(OGD)2h,然后培养24h；采用DAPI染色，荧光显微镜下观察细胞的形态变化。对照组除不进行OGD的损伤外，其他条件与实验组一致。结果培养12天较培养8天的皮质神经元细胞凋亡率增高，差杲有统计学意

2、义(P0.05);培养6天的皮质神经元的细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)o结论不同培养时间的皮质神经元对OGD损伤反应不同；未成熟的皮质神经元对OGD不敏感，具有耐受性;成熟的皮质神经元随成熟程度的增加，对OGD敏感性增强。【关键词】皮质神经元缺糖缺氧凋亡大鼠Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofculturetimeontheapoptosisoffetalratcorticalneuronsinducedbyoxygenand

3、glucosedeprivation(OGD).MethodsThecorticalneuronsseparatedform18-dayfetusratwereculturedfor6days,8daysand12daystogetimmature,grownandagedneuronsrespectively.OGD,onlyinthetestgroups,wasinducedbyoxygendeprivationfor2hoursaftertheculturemediumwasdisplac

4、edwithglucosefreemediumtocontinuetheculturefor24hours.TheapoptosiswasthenevaluatedafterDAPIstainingmethodwasusedtoillustratetheneuronalchanges.ResultsTheelevatedrateofneuronalapoptosiswashigherinthe12-daygroupthaninthe8-daygroup(P0.05).Nosignificantd

5、ifferencesinapoptosisresponsetoOGDinsultwerefoundbetweenthe6-daycultures,withandwithoutOGD(P0.05).ConclusionThereactiontoOGDinsultvarieswiththematurityoftheculturedcorticalneurons.Theimmatureneuronsareinsensitiveandtoleranttolackofoxygen,andthesensit

6、ivityincreaseswiththeageofneurons.Keywords:corticalneuron；oxygenandglucosedeprivation(OGD);apoptosis;rat哺乳动物的屮枢神经系统(centralnervoussystem,CNS)损伤修复参与的因子比较多，其屮凋亡是CNS损伤修复过程屮一个重要的手段。不同发育期的细胞，其凋亡的情况也不同。初步的研究结果提示，成熟的细胞或衰老的细胞对损伤反应更敏感，容易凋亡，从而保护机体健康的细胞；而未成熟的细胞

7、或活力强的细胞则可能对损伤有一定的耐受性。皮质神经元对学习、记忆有很重要的作用，其受损伤后经常会表现痴呆和记忆丧失，这在缺血性脑卒屮和老年痴呆症患者屮表现最为明显。随着屮国甚至世界社会老龄化的到来,老年病的研究将势在必行。关于不同年龄段的皮质神经元对缺糖缺氧(oxygenandglucosedeprivation,OGD)损伤的研究，国内外少见研究报道。木实验研究通过特殊的培养基体外培养大鼠脑皮质神经元，在培养的不同吋间段(即体外模拟不同年龄段的皮质神经元)制作细胞OGD损伤模型,模拟在体的“缺

8、氧缺血”状态，观察不同吋间段的皮质神经元对OGD的反应。1材料和方法1」材料1.1.1实验动物孕18天Sprague-Dawley(SD)大鼠，由徐州医学院实验动物屮心提供。1.1.2主要试剂高糖DMEM干粉培养基、无血清神经元基础培养基、B-27添加剂为美国GibcoBRL公司产詁，DMEM/F12为美国Hyclone公司产品，胎牛血清、马血清由屮国医学科学院血液研究所提供，膜酶为美国Difco公司产品，谷氨酰胺由上海实生细胞生物技术公司提供，甘氨酸、D・多聚赖氨酸、4；6-二眯基・2■苯基n