tlr3及其下游蛋白在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元表达及其意义

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1、徐州医学院硕士学位论文TLR3及其下游蛋白在缺糖氧诱导的原代皮质神经元表达及其意义姓名：宋璞申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：沈霞2012-05徐州医学院硕士学位论文TLR3及其下游蛋白在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元的表达及其意义中文摘要目的通过观察Toll样受体3(Toll一likereceptor3，TLR3)及其下游蛋白在TLR3激动剂poly(I：c)一LMw预处理后缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元的表达情况，探讨TLR3信号通路在缺血性脑血管病发生后皮质神经元损伤中的作用机制。方法取体外培养7天的SD大鼠胎鼠原代皮质神经元细胞，建立体

2、外缺糖缺氧细胞模型。分组如下：1)空白对照组：皮质神经元丁F常条件培养组；2)缺糖缺氧组(Oxygen—glucosedeprivation，OGD组)：缺糖缺氧2小时，复糖复氧24小时；3)TLR3激动剂poly(I：C)预处理组(激动剂组)：TLR3激动剂预处理8小时；4)TRL3激动剂+0GD组：TLR3激动剂预处理8小时后缺糖缺氧2小时，复糖复氧24小时。应用免疫荧光技术观察各组神经元数目及形态变化。以Westemblot法测定TLR3、IRF一3、IFN．B蛋白表达情况，以RT—PCR法测定TLR3mRNA、IRF一3mRNA、IFN—p

3、mRNA的表达情况，应用SPSSl6．0统计软件包进行数据分析。结果1．细胞免疫荧光结果显示：与空白对照组相比，OGD组、激动剂+OGD组神经元细胞状态较差，数目较少(P0．05)；与激动剂组相比，OGD组、激动剂+OGD组细胞状态较差，数目较少(P<0．05)；与激动剂+OGD组相比，OGD组细胞状态较差，数目较少(P

4、D组、激动剂+OGD组TLR3表达增强(P<0．05)；与激动剂+OGD组相比，OGD组TLR3表达兀明徐州医学院硕士学位论文显差异(P>O．05)。与空白对照组相比，OGD组、激动剂组、及激动剂+0GD组IRF．3、IFN—B表达增强(P

5、剂组相比，OGD组、激动剂+OGD组TLR3mRNA表达增强(P<0．05)；与激动剂+OGD组相比，OGD组TLR3mRNA表达无明显差异(P>0．05)。与窄白对照组相比，OGD组、激动剂组、及激动剂+OGD组IRF一3mRNA、IFN—fjmRNA表达增强(P

6、。提示TLR3可能通过MyD88非依赖通路，介导神经元缺【缸／再灌注的炎性损伤。2．在神经元缺糖缺氧前给予TLR3激动剂Poly(I：C)，可改善缺糖缺氧后神经元的损伤情况。关键词脑缺血／再灌注损伤；缺糖缺氧；原代皮质神经元；Toll样受体3；IRF．3：IFN—p3徐州医学院硕士学位论文ExpressionandsignincanceofTLR3anditsdownstreamprotelnlnoxygen—glucosedeprlVatlon—lnduced●1●J●●1DrlmarVC0rtlCalneUron●J●1■vAbstractob

7、jective1bexplorethemechanismofTLR3inconicalneuroninjuryaRerischemiccerebrovascLllardiseasebyobserVingtheexpressionofTLR3(7I’oll—likereceptor3，TLR3)andilsdownstreamproteininoxygen—91ucosedepriVation—inducedprimarycorticaln吼lronaRerpoly(I：C)一LMWpretreatmentMethodsTheprimaryratco

8、rticalneuronculturedf．or7dayswasselectedtoestablishoxygen—glu