hpk1在缺糖缺氧诱导的大鼠海马神经元凋亡中的作用

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1、HPK1在缺糖缺氧诱导的大鼠海马神经元凋亡中的作用【摘要】目的观察造血祖细胞激酶1（HPK1）对缺糖缺氧（OGD）诱导的大鼠海马神经元凋亡的作用。方法采用细胞免疫荧光技术通过免疫荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察HPK1是否在大鼠脑细胞中存在；采用DAPI染色技术观察HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡的作用。结果在体外培养的原代大鼠海马神经元中有HPK1的表达。HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡具有保护作用，并有剂量依赖性。结论HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡具有保护作用。【关

2、键词】造血祖细胞激酶1;缺糖缺氧;凋亡反；义寡核苷酸　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheroleofHPK1inhippocampusneuronapoptosisinducedbyoxygen-glucosedeprivation(OGD).MethodsImmunofluorescencetechniquewasusedtoinvestigatewhethertherewasHPK1inhippocampusneuronunderthefluorescencemicroscope

3、andtheconfocalmicroscopy.DAPIstainingwasusedtoinvestigatetheroleofHPK1antisenseoligodeoxynucleotidesinhippocampusneurondeathinducedbyOGD.ResultsItwasfoundthatHPK1wereexpressedinrathippocampusneuronsculturedinvitroandadministrationofHPK110antisenseoligodeoxynucle

4、otidescouldsignificantlydecreasetheapoptosisofhippocampusneuronswhichinducedbyOGD.ConclusionKnock-downofHPK1;expressionprovidesneuroprotectionagainsttheapoptosisofhippocampusneuronswhichinducedbyOGD.　　Keywords:HPK1;oxygen-glucosedeprivation;apoptosis;antisenseol

5、igodeoxynucleotide　　缺血性脑中风已成为严重威胁人类生命的疾病，因此积极探索缺血性脑损伤的分子机制并提出新的治疗措施，有着极其重要的医学价值和社会意义。　　造血祖细胞激酶1（hematopoieticprogenitorkinase1，HPK1）是造血系统特异性丝氨酸、苏氨酸蛋白激酶，属于哺乳动物Ste20相关蛋白激酶的MAP4K家族［1］。它的N末端由1个STE-20样激酶结构域、4个脯氨酸富集motif、1个caspase切割位点组成，C末端为1个Citron同源结构域。HPK1主要在造血组织和细

6、胞中表达。近年来大量研究结果表明，HPK1参与许多信号级联反应，包括MAPK(mitogen-activatedprotein10kinase)信号、抗原受体信号、凋亡信号、生长因子信号以及细胞因子信号。然而，继往对于HPK1的研究全部集中在造血系统。本实验旨在探讨HPK1是否存在于大鼠海马神经元中，及其在缺糖缺氧(oxygen-glucosedeprivation,OGD)所诱导的大鼠海马神经元凋亡中的作用。　　1材料和方法　　1.1实验动物及材料清洁级孕17～18天Sprague-Dawley大鼠，徐州医学院实验动

7、物中心提供。　　高糖DMEM干粉培养基、无血清神经元基础培养基、B-27添加剂为美国GibcoBRL公司产品,DMEM/F12为美国Hyclone公司产品,胎牛血清、马血清由中国医学科学院血液研究所提供,胰酶为美国Difco公司产品,谷氨酰胺由上海实生细胞生物技术公司提供,甘氨酸、D-多聚赖氨酸、4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidine-2-phenylindole,DAPI)、联苯二胺为美国Sigma公司产品,其余试剂为国产分析纯。　　HPK1反义寡核苷酸序列（AS-ODNs）5′-AGGGTCC

8、ACGACGTCCATCC-3′、HPK1错义寡核苷酸序列（MS-ODNs）5′-CACAGCGTCGTACCCGCAGT-3′由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。　　1.2海马神经元培养10参考我室顾正林等［2］报道方法,并略作改动。孕17～18天Sprague-Dawley大鼠断头处死,迅速取出胚胎置于冰冷的DMEM溶液中