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1、大鼠牙囊细胞培养方法的探讨【摘要】【目的】探讨大鼠牙囊细胞体外培养的方法。【方法】分离出大鼠牙囊组织，分别采用组织块培养法、细胞消化分散法、及改良组织块法进行牙囊细胞原代及传代培养，倒置相差显微镜下进行细胞形态学观察，透射电镜观察细胞超微结构。【结果】培养至第3天，倒置相差显微镜观察发现，采用组织块培养法，见少数细胞从组织块爬出；而细胞消化分散法则可获得数量多的牙囊细胞，但与杂质细胞混杂生长；改良组织块法见量多、相对纯的牙囊细胞。电镜下牙囊细胞无桥粒，胞浆中含有高密度电子颗粒和大量粗内质网。组织块法
2、、细胞消化分散法和改良组织块法牙囊细胞培养成功率分别为80%、60%和100%；分别于10d、7d和6d左右进行第一次传代。【结论】改良组织块法是一种良好的大鼠牙囊细胞培养方法。编辑。【关键词】牙囊细胞；细胞培养；方法学Abstract:【Objective】Toexploretheculturemethodofratdentalfolliclecellsinvitro.【Methods】Thedentalfollicle(DF)tissuesweredissectedforprimarygener
3、ationandpassagecuIturebymethodsofexplant,dissociationee11andimprovedexplant,respective!y.Consequently,themorphologyoftheculturedfirstpassageDFcelucturewerediscoverasedifferencemicroonelectronicmicrosIsandthEirultrastredunderinversionphscopeandtransniis
4、sicope,respective!y.【ResuIts]mtheexplantbywayofellsmixingwithimpubywayofdissociatiogequantityofrelatiscoveredbywayofimpametime・Transmissipyshowedthatthecuedelectron-densegrroughendoplasmicremoes・AtaboutlOth,7thand6thdayinvitrofirsttimewithachiey,sixtya
5、ndonehundrxplant,dissociatioxplantculturerespeAtthethirddayinvitro,onlyafewcellsextendedfroexplant,andmanyDFcrecel1sadheredwal1ncel1.However,alarvepureDFcellswasdirovedexplantatthesonelectronmicroscolturedcellscontainanules,andabundantticulumandnodesmo
6、s,DFce11swerepassedvementratioofEIghtedpercentbywaysofencellandimprovedectively.【Conclusion]ImprovedexplantculturewasagoodculturingmethodforratDFcells・Keywords：dentalfolliclecells；cellculture；methodology牙囊对牙齿萌出起重要作用。牙萌出必须是在牙槽骨的吸收、形成牙槽骨的通道后，才能够完成这一生理过程［
7、1］。Cahill和Marks［2,3］研究表明，以手术方法去除小鼠牙囊，牙齿则不能萌出；而保留牙囊，用其它物质替代牙胚，结果替代物可以萌出。Larson［4］在狗前磨牙牙冠形成后萌出前四周去除牙囊，牙齿同样不能萌出，将剥离的牙囊立即放回成釉器表面，牙齿即能重新萌出。这些研究证明牙齿萌出依赖牙囊的存在。牙囊在牙齿萌出过程中，从组织、细胞和分子水平上对牙齿萌出起重要的调控作用［5,6］。目前关于牙囊细胞的体外培养，国内外报道尚不多［7］。本研究以SD大鼠为实验对象，采用组织块培养法、细胞消化分散法及改
8、良组织块法培养大鼠牙囊细胞,比较不同方法的优缺点，以寻求培养牙囊细胞的最佳方法，为研究牙囊在牙齿萌岀过程中的作用在细胞方面提供依据。1材料和方法试剂、仪器及动物实验来源MEM培养基，胎牛血清，HEPES,胰蛋白酶，左旋谷氨酰胺，青霉素、链霉素，丙酮酸钠，PBS,细胞培养瓶，超净工作台，细胞培养箱，倒置相差显微镜，SD乳鼠。牙囊组织的分离与获取取5只新生6或7d的SD乳鼠，引颈法处死后，用75%酒精浸泡2-3s,外科法取出下颌骨，置入D-Hanks'平衡盐溶液，在解剖显
