永生化大鼠牙囊细胞增殖特性的初步研究

《永生化大鼠牙囊细胞增殖特性的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学硕士学位论文永生化大鼠牙囊细胞增殖特性的初步研究姓名：刘婷申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：宋锦璘201205永生化大鼠牙囊细胞增殖特性的初步研究摘要牙囊来源于外胚间充质，作为包绕成釉器的一层疏松结缔组织，在牙齿发育的过程中将发育成牙周膜、牙骨质和固有牙槽骨。在经典的牙齿发育学说中，将牙囊组织视为形成牙周组织的始基。牙囊细胞(Dentalfolliclecells，DFC)作为牙周组织分化发育的前体细胞，能在一定的时间和阶段向牙周膜成纤维细胞、成骨细胞、成牙骨质细胞分化，是牙周组织工程研究中受到广泛关注的候选种子细胞之一。但是，DFC在体外培养过程中，常出现自我更新

2、能力差、易老化等现象，还缺乏特异性标志导致体外纯化DFC变得异常困难，使DFC难以实现体外大量扩增。而永生化细胞具有多次传代仍能稳定保持细胞原有功能状态的特性，可以利用该特性使DFC获得永生，并为牙周组织工程相关研究提供充足的细胞来源。以往研究证实在哺乳动物或啮齿类动物细胞中，SV40转染可提高细胞的永生化率。对于永生化细胞增殖特性的研究有利于了解细胞增殖与衰老的机制。但是，迄今为止尚未见永生化大鼠牙囊细胞增殖效应的相关研究。本研究将SV40基因导入大鼠牙囊细胞(rats’dentalfolliclecells，rDFC)，建立牙囊细胞永生化体系并研究其增殖特性，以利于DFC在}项目资助：

3、1．国家自然科学基金面上项目：基于牙周组织工程技术的低强度脉冲超声波促进牙病组织修复作用研究(NO．30870754)：2．重庆市教委第二批优秀专业技术人才资助计划：渝教人2010[72]构建永生化人牙囊细胞系应用于牙周组织再生的实验研究。重庆医科大学硕士研究生学位论文牙周组织工程研究和牙齿萌出机理研究中发挥作用。目的：构建永生化大鼠牙囊细胞系并初步研究其增殖特性，为牙周组织工程研究和牙齿萌出机理研究提供可靠的种子细胞来源。方法：1．rDFC的纯化培养及组织学来源鉴定；2．永生化的大鼠牙囊细胞系的建立及克隆形成能力、端粒变化、致瘤性等生物学特性的鉴定；3．永生化大鼠牙囊细胞增殖特性的初步研

4、究。结果：1．免疫组化法证实所培养rDFC来源于外胚间充质；2．永生化rDFC可传代至40代，生长依然旺盛，存在较强细胞活性；3．永生化rDFC平板克隆形成率高于正常细胞；软琼脂集落形成试验中未见细胞克隆形成；致瘤性实验成瘤率为0；4．RT-PCR检测发现SV40已整合入永生化牙囊细胞系中，端粒增长；5．转染SV40永生化基因的rDFC与转染前细胞无明显差异，具有相似的功能状态和增殖特性。结论：本研究建立的rDFC永生化体系具有与正常rDFC类似的形态特征重庆医科奎兰堡主婴塑生兰垡笙茎——————————————一———————————————一及生物学功能，在体外有无限增殖能力，且多次传

5、代仍具有相对稳定的功能状态和增殖特性，可做为牙周组织工程研究和牙齿萌出机理研究理想的细胞来源。关键词：牙囊细胞，组织工程，细胞永生化，sV40，增殖RESEARCH．ONPROLIFERATIONPROPERTYOFIMMORTALIZEDRATStDENTALFOLLICLECELLSABSTRACTThedent舒南llicleisori‘gl‘na。t‘u1fromfillingofe越emalt⋯illl、U⋯lyUW。。1i—l二iL一,LllisalayeroflooseconnectivetissuerevolvesarotmdtheeXtemMareaotenalnelor

6、gan．Inthelaterstageofdentaldevelopment，thedentalcement,dentalDeriodontalandtheinherentalveolarbonewillbeforlned·Thereforeintheclassicdentaldevelopmenttheory，thedentalfollicletissue1Sseenasthebasisforthefonllationofdentalperiodontal．entalfolliclecells(DFC)isservedastheprecursorcellduringthedifferen

7、tiationdevelopmentofdentalperiodontala11ditisabletoformdentalperiodontalforfibroblast，osteoblast’cementablastdifferentiationatanytimeandstagewhlch1soneofthemostpoplllarcandidateseedcellsinthefieldofdentalperiodon