医学论文-大鼠牙囊细胞培养方法的探讨

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1、医学论文-大鼠牙囊细胞培养方法的探讨【摘要】 【目的】探讨大鼠牙囊细胞体外培养的方法。【方法】分离出大鼠牙囊组织，分别采用组织块培养法、细胞消化分散法、及改良组织块法进行牙囊细胞原代及传代培养，倒置相差显微镜下进行细胞形态学观察，透射电镜观察细胞超微结构。【结果】培养至第3天，倒置相差显微镜观察发现，采用组织块培养法，见少数细胞从组织块爬出；而细胞消化分散法则可获得数量多的牙囊细胞，但与杂质细胞混杂生长；改良组织块法见量多、相对纯的牙囊细胞。电镜下牙囊细胞无桥粒，胞浆中含有高密度电子颗粒和大量粗

2、面内质网。组织块法、细胞消化分散法和改良组织块法牙囊细胞培养成功率分别为80%、60%和100%；分别于10d、7d和6d左右进行第一次传代。【结论】改良组织块法是一种良好的大鼠牙囊细胞培养方法。【关键词】 牙囊细胞；细胞培养；方法学   Abstract：【Objective】Toexploretheculturemethodofratdentalfolliclecellsinvitro.【Methods】Thedentalfollicle(DF)tissuesweredissectedfor

3、primarygenerationandpassageculturebymethodsofexplant,dissociationcellandimprovedexplant,respectively.Consequently,themorphologyoftheculturedfirstpassageDFcellsandtheirultrastructurewerediscoveredunderinversionphasedifferencemicroscopeandtransmissione

4、lectronicmicroscope,respectively.【Results】Atthethirddayinvitro,onlyafewcellsextendedfromtheexplantbywayofexplant,andmanyDFcellsmixingwithimpurecellsadheredwallbywayofdissociationcell.However,alargequantityofrelativepureDFcellswasdiscoveredbywayofimpr

5、ovedexplantatthesametime.Transmissionelectronmicroscopyshowed thattheculturedcellscontainedelectron-densegranules,andabundantroughendoplasmicreticulum（RER）andnodesmosmoes.Atabout10th,7thand6thdayinvitro,DFcellswerepassedfirsttimewithachievementratioo

6、feighty,sixtyandonehundredpercentbywaysofexplant,dissociationcell andimprovedexplantculturerespectively.【Conclusion】ImprovedexplantculturewasagoodculturingmethodforratDFcells.   Keywords:dentalfolliclecells；cellculture；methodology   牙囊对牙齿萌出起重要作用。牙萌出必

7、须是在牙槽骨的吸收、形成牙槽骨的通道后，才能够完成这一生理过程[1]。Cahill和Marks[2，3]研究表明，以手术方法去除小鼠牙囊，牙齿则不能萌出；而保留牙囊，用其它物质替代牙胚，结果替代物可以萌出。Larson[4]在狗前磨牙牙冠形成后萌出前四周去除牙囊，牙齿同样不能萌出，将剥离的牙囊立即放回成釉器表面，牙齿即能重新萌出。这些研究证明牙齿萌出依赖牙囊的存在。牙囊在牙齿萌出过程中，从组织、细胞和分子水平上对牙齿萌出起重要的调控作用[5，6]。目前关于牙囊细胞的体外培养，国内外报道尚不多[7

8、]。本研究以SD大鼠为实验对象，采用组织块培养法、细胞消化分散法及改良组织块法培养大鼠牙囊细胞，比较不同方法的优缺点，以寻求培养牙囊细胞的最佳方法，为研究牙囊在牙齿萌出过程中的作用在细胞方面提供依据。   1  材料和方法   1.1  试剂、仪器及动物实验来源   MEM培养基（GIBCO公司，美国），胎牛血清（杭州四季青生物材料有限公司），HEPES（Sigma公司，美国），胰蛋白酶（AdvancedTechnology&IndustrialCompany），左旋谷氨酰胺（GIBCO公司，美