高效液相色谱法测.ppt

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1、高效液相色谱法测定垂盆草中槲皮素的含量学院：化学化工班级：09化学姓名：冯晶学号：099060141028摘要目的：建立高效液相色谱法测定垂盆草中槲皮素含量的方法。方法：采用Waters2487,流动相为甲醇-水（50：50），检测波长360nm，流速0.800ml/min，柱温为30℃。结果：槲皮素质量与峰面积有良好的线性关系，线性范围为0.02～0.4ug（r=0.9994）。槲皮素的平均加样回收率为93.12%，RSD=0.86。结论：该方法简单、重现性好，结果准确可靠，可用于垂盆草中槲皮素的质量控制。关键词：高效液相色谱法；

2、垂盆草；槲皮素实验部分一.仪器与药品1.1仪器LC-10ATvp高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器(日本岛津公司)；N3000色谱工作站（浙江大学），FA2004电子天平（ShangHaiBalanceInstrumentFactoryofP.RChina），KQ-100DA型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），微量进样器（宁波市镇海玻璃仪器厂），超纯水仪。1.2试剂和药品槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100081-200907供HPLC法含量测定），垂盆草药材。甲醇为色谱纯，水为超纯水。其他试剂均为分析纯。二.

3、实验方法与结果2.1色谱条件色谱柱：HypersilODS-C18(250mm×4.6mm,5um)(日本岛津公司)，流动相为甲醇-水（50：50），检测波长360nm，流速0.800ml/min，柱温为30℃，2.2对照品溶液的制备精密取槲皮素2mg置于25ml容量瓶中，加甲醇溶解，稀释定容后超声处理30分钟，摇匀,作为对照品储备液[4]（1ml中含有槲皮素0.08mg）。对照品的HPLC色谱图见图1图1对照品溶液的色谱图2.3供试品溶液的制备取本品粉末（过二号筛）约0.5g，精密测定，加入甲醇-25%盐酸溶液（4：1）混合溶液25ml

4、,称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇-25%盐酸溶液（4:1）混合溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，即得。图2供试品溶液的色谱图2.4线性关系的考察精密量取上述0.08mg/ml的对照品溶液。分别准确量取4ul、6ul、8ul、10ul、12ul溶液进样。以峰面积Y（mv•s）为纵坐标，质量（ug）为横坐标，进行线性回归分析。得到回归方程为Y=1.8×106X-3.3×105，r=0.9994.表明槲皮素在0.02～0.4ug范围内与峰面积积分呈良好的线性关系[6]。图4线性关系考察图Y=1.8×106X-3.3×105

5、R2=0.9994010000002000000300000040000005000000600000070000008000000900000010000000012345线性2.5精密度实验每次精密吸取上述对照品溶液10ul,连续进样6次，记录色谱峰的峰面积，平均峰面积为A=8587509。槲皮素峰面积的RSD为1.52%，结果表明，仪器的精密度良好。2.6稳定性试验取对照品溶液，按上述色谱条件，分别在0小时、6小时、12小时、18小时、24小时进样测定，记录峰面积，得到其峰面积的RSD为1.37%，表明24h内对照品溶液中槲皮素稳定性

6、良好。2.7重复性实验取0.02g/ml的供试品溶液5份，按供试品溶液含量测定方法操作并测定槲皮素的含量，其结果RSD为1.47%，重复性良好[7]。2.8回收率试验精密称取样品0.5g，用一定量的甲醇溶解，加入0.26mg的对照品，重复进样5次，每次进样10ul,根据色谱峰的峰面积计算槲皮素的含量及回收率。2.9样品含量测定取“2.3”节中配置的样品溶液5ul在上述色谱条件下进行含量测定[8]三.讨论3.1实验方法结论与容量法测定生物碱含量[9]的方法相比，该方法精密度高、分离度好、重现性良好，结果准确可靠。3.2色谱条件的选择流动

7、相：流动相也可以是为乙腈-水系统,但据相关文献[10]甲醇-水系统分离效果比较好；甲醇增加可改善峰形，减少拖尾，但甲醇比例过高，分离效果下降，而以甲醇-水(50∶50)为流动相，分析时间适中,槲皮素与其他组分色谱峰达到较好分离。谢谢观看