PPT—高效液相色谱法

《PPT—高效液相色谱法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、高效液相色谱法HighPerformanceLiquidChromatography（HPLC）一、前言HPLC是70年代以后发展最快的一个分析化学分支，现已成为生化、医学、药物临床、化学化工、食品卫生、环保检测等领域最常用的分离分析手段。我国：课时安排：第一章：高效液相色谱的基本原理6学时第二章：高效液相色谱的仪器装置2学时第三章：液固、液液、键合相色谱4学时第四章：离子交换色谱和离子对色谱3学时第五章：凝胶渗透色谱1学时第六章：实验技术和辅助实验技术2学时机动2学时实验安排：实验一：样品保留值的重复性测定实验二：流动相极性变化对溶质保留值的影响实

2、验三：试样中苯甲酸的定性分析参考书籍：1.色谱理论基础（卢佩章、戴朝政编）2.高效液相色谱法（邹汉法、张玉奎、卢佩章编著）3.高效液相色谱方法及应用（色谱技术丛书、化学工业出版社、于世林编著)第一章、高效液相色谱的基本原理§1-1概述一、发展历史1903年提出、1969～1970年开始发展流动相－－液体基本原理：在经典液相色谱基础上，引入气相色谱理论技术：采用高效固定相、高压泵、高灵敏检测器实现：分析速度快、分离效率高、操作自动化工作原理：通过高压泵，连续地将流动相按一定流速流过柱子；通过进样器，注入样品混合物。由于混合物中各组分性质不同，因而它们在

3、柱内移动速度不同而逐渐分离。通过检测器检测，得到组分的电信号并进行放大；记录仪将放大的电信号以图形形式记录下来。高效液相色谱法特点：1.高压：一般：150～300kg/cm2甚至：500kg/cm22.高速：两相间交换：千分之几秒分析时间较经典法少很多(几分~几十分钟)3高效：气相：2000塔板/米液相：5000塔板/米4.高灵敏度：紫外检测器：10－9g数量级荧光检测器：10－11g(百万分之几）试样量小（几微升）5.高选择性：可分析在性质上极为相似化合物（手性化合物、同位素、同分异构、空间异构）与气相色谱比较：相同点：都是重要的分离、分析手段气相

4、的基本理论（塔板理论、定性定量方法）基本术语（色谱参数、色谱图、色谱柱效）不同点：ⅰ应用范围：气相：易挥发、热稳定液相：不易挥发、热不稳定但具有一定溶解性化合物，不适合气体。ⅱ流动相作用：气相：运载样品，不影响色谱分离液相：运载样品，参与、影响色谱分离，且起主要作用。ⅲ分析样品：气相：破坏样品，不能回收。液相：不破坏样品，能回收。说明：HPLC的分类：ⅰ液固吸附色谱（LSC)（利用样品分子在固定相上吸附性能差异而分离）ⅱ液液分配色谱（LLC）（利用样品分子在两相中分配系数不同导致溶解度不同而分离）（键合相色谱60％）ⅲ离子交换色谱（IEC）（利用样品

5、分子的电荷性、导电性不同，导致对固定相的亲合力不同而分离）ⅳ体积排阻色谱（SEC)（利用溶质分子大小不同导致对固定相的渗透力不同而分离）§1-2色谱分离和保留值一、色谱过程定义——由于样品中各组分在不互溶的两相间平衡分配的不同，在色谱柱中进行分离的过程固定相：柱中固定不动移动相：流过柱子的液体综合来看：不同组分分离状况取决于：ⅰ热力学平衡问题：各组分分配系数、吸附力、亲合力之间差异——影响出峰时间ⅱ动力学平衡问题：溶质扩散系数、填料颗粒、填充情况、流速——影响峰形色谱过程特点：ⅰ组分经无数次平衡分配后，在柱的流出液中浓度对分离时间呈高斯曲线型ⅱ色谱条

6、件一定时，各组分都有特定时间在图谱中出现，称为保留时间tR。ⅲ柱效一定时，保留值越小，峰窄；保留值越大，峰宽。ⅳ相邻峰间tR相差越大，组分间越易分离二、容量因子和保留值色谱的保留作用——化合物进入柱内，即在两相间不断进行平衡分配，由于不同化合物理化性质不同，在两相中存在量也不同。固定相中量多，柱内保留时间长；流动相中量多，柱内保留时间短。容量因子k′——某一组分平衡时，两相中存在量的比值。要得到理想分离，k′应保持在1～10之间k′太小——没有充分利用填料的分离能力。k′太大——分析时间太长。§1－3色谱柱的分离效率分离过程基本理论：ⅰ各组分在两

7、相间分配情况：tR——由色谱过程的热力学因素所控制ⅱ各组分在色谱柱中的运动情况：Y1/2——由色谱过程的动力学因素所控制一、理论塔板数N二、理论塔板高度H三、峰扩展和速率方程式峰扩展——某一组分流过时，经过多次平衡分配，使开始处于“浓缩”状态的组分被移动相稀释，最后得到有一定宽度的色谱峰，称之。柱外因素：ⅰ检测器流动池体积ⅱ柱出口到检测器的连接管ⅲ进样器死体积柱内峰扩展影响因素：①涡流扩散减小措施：ⅰ颗粒大小保持一致ⅱ填装均匀ⅲ尽量采用球型填料涡流扩散随柱长增加而增加，与流动相流速无关。②分子扩散减小措施：加大流动相流速③传质——溶质分子在两相间浓度

8、的不同，从浓度高的相，不断迁移至浓度低的相，直到浓度达到平衡，这种质量迁移过程称之。ⅰ固定相传质：⑴固相固定