致病性副溶血弧菌生物膜形成特性研究.pdf

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1、第３２卷第５期海洋学报Ｖｏｌ．３２，Ｎｏ．５２０１０年９月ＡＣＴＡＯＣＥＡＮＯＬＯＧＩＣＡＳＩＮＩＣＡＳｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１０致病性副溶血弧菌生物膜形成特性研究陈珍１，覃映雪１，邹文政１，徐晓津１，邢颜丽１，鄢庆枇１（１．集美大学水产学院福建省高校水产科技与食品安全重点实验室，福建厦门３６１０２１）摘要：采用改良的微孔板法测定了１２株弧菌的形成生物膜的效果，选择形成生物膜效果最好的副溶血弧菌ＮＤ０２，进一步研究了环境因子对其生物膜形成的影响。实验结果显示副溶血弧菌ＮＤ７８０２菌株在静置培养２４～３６ｈ后形成成熟的生物膜，在起始菌浓度为１０～１０ＣＦＵ／ｍＬ形成生物２＋膜的量最大；在

2、３０℃，ＮａＣｌ浓度为３％～５％，ｐＨ偏弱碱性时的生物膜犗犇值最大；Ｃａ促进副５９０２＋溶血弧菌生物膜的形成，而Ｍｇ抑制生物膜的形成；副溶血弧菌在分别经大黄鱼表皮黏液、肠黏液和肝脏提取液包被的的基质上形成生物膜的作用明显，鳃黏液和脾脏提取液中次之，肌肉提取液包被后生物膜形成量最低。以上结果表明，副溶血弧菌ＮＤ０２菌株能形成稳定而明显的生物膜，而且生物膜的形成受温度、ＮａＣｌ浓度、ｐＨ值等环境因子的影响。关键词：副溶血弧菌；生物膜；环境因子中图分类号：Ｒ３７８．３文献标志码：Ａ文章编号：０２５３４１９３（２０１０）０５０１１００７计，６５％人类细菌性感染是由形成生物膜的细菌引１引言［

3、９］起的，而通过对细菌生物膜的研究，可望寻找到有副溶血弧菌（犞犻犫狉犻狅狆犪狉犪犺犪犲犿狅犾狔狋犻犮狌狊）是一种效途径来控制细菌的相关感染，因此生物膜已经成嗜盐性革兰氏阴性菌，广泛分布于养殖海域中，是海为当今医学微生物学的一个研究热点，已对霍乱弧［１］菌等致病性弧菌的生物膜方面进行了许多研究［１０］。水养殖中的一种重要条件致病菌，能引起鱼、虾、［２］但目前尚无关于副溶血弧菌生物膜形成特性的研究蟹和贝类等多种养殖动物的疾病，给水产养殖业造成严重的经济损失。此外，副溶血弧菌还通过食报道。［３］本文从不同环境条件对副溶血弧菌形成生物膜物污染，对人类健康造成严重危害。由于副溶血弧菌是重要的人鱼共患

4、病原之一，所以其致病机理影响的方面进行研究，探索副溶血弧菌生物膜形成［４］［５］的规律，以期为揭示副溶血弧菌的致病机理和探索引起了有关研究者的关注，对其生态、黏附以及［３］感染性等多方面进行了研究。疾病防治技术提供理论依据。许多细菌能够附着于固体表面生长，形成由细２材料与方法菌细胞和包裹着细菌的基质所组成的结构性细菌群［６］落，称为生物膜（ｂｉｏｆｉｌｍ）。生物膜中的细菌对抗２１菌株及培养条件［１１］生素的抗性很强且生物膜的胞外基质成分还能有效副溶血弧菌ＮＤ０２分离自患病大黄鱼，保存［７］抑制免疫细胞的吞噬作用，不仅如此，生物膜还能于本实验室的－８０℃超低温冰箱。通过释放膜内细菌而导致

5、再次感染，所以由致病菌溶藻弧菌（犞．犪犾犵犻狀狅犾狔狋犻犮狌狊，Ａｓ．１．１８３３）、副溶［８］形成的生物膜给疾病的治疗带来很大困难。据估血弧菌（Ａｓ．１．１６１４）、河流弧菌（犞．犳犾狌狏犻犪犾，Ａｓ．收稿日期：２０１００１１７；修订日期：２０１００５０６。基金项目：国家“八六三”计划项目（２００７ＡＡ０９Ｚ１１５）；厦门市科技项目（３５０２Ｚ２００７３０１９；３５０２Ｚ２００７３０２０）。作者简介：陈珍（１９８６—），女，湖北省黄冈市人，硕士研究生，主要从事水产病害研究。Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｚｈｅｎｈｂｎｕ＠１６３．ｃｏｍ通信作者：鄢庆枇，教授，从事水产病害研究，Ｅｍａｉ

6、ｌ：ｙａｎｑｐ＠ｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ５期陈珍等：致病性副溶血弧菌生物膜形成特性研究１１１１．１６０８）购自中国科学院微生物研究所，鳗弧菌（犞．２．４．３ｐＨ对形成生物膜的影响犪狀犵狌犻犾犾犪狉狌犿）由华东理工大学馈赠，７株其他弧菌配制ｐＨ值分别为５，６，７，８，９，１０的ＴＳＢ，按（Ａ１６，Ａ１９，Ａ２０，Ｂ２，Ｂ５，Ｂ９和Ｂ１２）分离自厦２．２节的方法进行试验，比较不同起始ｐＨ值下的门集美海区。生物膜形成情况。细菌接种于２％的ＮａＣｌ胰蛋白胨大豆培养２＋２＋２．４．４Ｃａ，Ｍｇ对形成生物膜的影响液（ＴＳＢ）中，２８℃，１８０ｒ／ｍｉｎ培养１０ｈ后４℃，分别制备含０％，０．２

7、５％，０．５０％，１．０％，１．５％４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ收集菌体，用无菌生理盐水将菌浓度调整到１０８ＣＦＵ／ｍＬ左右待用。ＣａＣｌ２，ＭｇＣｌ２的ＴＳＢ，按２．２节的方法进行试验，比２＋２＋２２生物膜的形成与测定较Ｃａ，Ｍｇ对生物膜形成的影响。［１２］细菌生物膜的形成与定量测定参考Ｐｒａｔｔ等２．５副溶血弧菌在不同基质上形成生物膜的情况的方法，并进行适当改进，具体步骤如下：将菌悬液２．５．１黏液与组织提取液