水产品中致病性副溶血性弧菌的检测

《水产品中致病性副溶血性弧菌的检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、重庆医科大学硕士学位论文水产品中致病性副溶血性弧菌的检测姓名：王宏萍申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：鲍依稀;周晓明20090501重庆医科大学硕士研究生学位论文水产品中致病性副溶血性弧菌的检测摘要副溶血性弧菌是食物中毒的重要病原菌。环境中95％的副溶血性弧菌为非致病菌，5％为致病菌。判断水产品的食用合格性需要准确鉴定5％的致病菌。神奈川溶血反应曾作为致病性判定的标准，但该试验操作繁琐，易产生假阳性。耐热性溶血毒素作为副溶血性弧菌致病性的主要毒力因子，可由tdh基因的检出来判断菌株的致病性。该方法尚未在国内进行应用。本研究建立了一个以16S

2、rDNA序列分析鉴定副溶血性弧菌，以tdh基因测定的PCR和实时荧光定量PCR反应体系定量反映副溶血性弧菌致病性的方法，并与神奈川溶血反应，脲酶反应进行比较。使用16SrDNA分析临床分离的181株常见菌作为对照，对39株副溶血性弧菌进行测定；36／39株副溶血性弧菌的鉴定结果与生化培养法相符，对临床分离菌株均无误判。对97株腹泻患者来源和75株环境来源分离的副溶血性弧菌进行tdh基因测定，神奈川溶血反应和脲酶反应。腹泻患者和环境来源菌株的tdh基因检出率有显著差异(83．51％W13．70％，P<0．001)。神奈川溶血反应和脲酶反应的区分能力低于td

3、h基因检测。建立了一个实时荧光定量PCR反应以测定tdh基因拷贝水平，定量公式为Y=．3．144109x+43．229(R=0．997，P<0．001)。关键词：副溶血

4、生弧菌，16SrDNA序列分析，tdh基因，实时荧定量PCR，神奈川溶血反应资助渠道：本课题受上海市科委技术标准专项06dz05029资助以及上海申康医院发展中心病原体检测技术平台资助重庆医科大学硕士研究生学位论文DetectionofPathogenicVibrioparahaemolyticusinAquaticProductsABSTRACTVibrioparahaemolyt&u

5、sisanimportantmicroorganismpathogenforfoodintoxicationcases．Previousstudieshadreportedthat5％ofVibrioparahaemolyticuswerepathogenic，whereasmorethan95％ofisolateswerenonpathogenic．Thus，itisessentialtodistinguishpathogenicVibrioparahaemolyticusisolatesfromnonpathogenicones．Kanagawa．p

6、henomenontesthadeverbeenusedforidentificationofpathogenicHbrioparahaemolyticus．Buritistoocomplicatedtoberepeatable．Thermostabledirecthemolysin,whichisencodedbytdhgenehadbeenregardedasthevirulencefactorforthisbacterium．ThedetectionoftdhgenecanbeusedtoreflectthepatogenicityofVibrio

7、parahaemolyticus．ThismethodhadnotyetbeenappliedinChina．Weestablisheda16SrDNAtestforcharacterizationofVibrioparahaemolyticusisolatesandatdhpolymerasechainreactionforidentificationofpathogenicHbrioparahaemolyticusisolates．Thesetests’SabilitiesofidentifyingpathogenicHbrioparahaemoly

8、ticuswerecomparedwithKanagawahemolysintestorureasetest．Thirty—sixof39Hbriop口厂口办口P7”D纱f纪“sisolates(92．30％)SOfartestedby16SrDNAwereidentifiedasHbrioparahaemolyticus，3重庆医科大学硕士研究生学位论文concordantwiththeresultsfrombiochemistrytests．Noneof181clinicalbacteriaisolateswasmisclassifiedtobeHb

9、rioparahaemolyticus．tdhpositiverateofVib