牙鲆注射免疫鳗弧菌灭活疫苗后13种免疫相关基因表达的变化.pdf

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1、第46卷第2期2016年2月中国海洋大学学报PERI()DICAL0F0CEANUNIVERSITY0FCHINA46(2)：042～053Feb．．2016牙鲆注射免疫鳗弧菌灭活疫苗后13种免疫相关基因表达的变化。薛洁，宋晓青，邢婧”，战文斌(中国海洋大学水产动物病害与免疫学研究室，山东青岛266003)摘要：为制备鳗弧菌(Ⅵ6rio伽g甜删口r跏)全菌灭活疫苗，采用腹腔注射的方式免疫牙鲆(PⅡm胁^f矗了sozi说ce“s)。于免疫后o、4、8、12、24、48、72、96h和7、14d取脾、头肾、鳃组织，提取mRNA，应用实时荧光定量PCR法检测3个组织中Toll一lik

2、e受体(TLR)2、TLR5M、髓样分化因子MyD88、核转录因子(NF)一JcB、白介素(IL)一6、干扰素(IFN)7、趋化因子CXC、补体c3、C型溶菌酶(C-Lyz)、热休克蛋白(Hsp)一70、主要组织相容性复合体MHCII、T细胞表面受体cD4和膜结合型免疫球蛋白(mIg)D这13种免疫相关基因的表达。研究显示：注射免疫后，3个组织中，除了mlgD和TLR5M基因，其余11种基因与对照组相比均呈上调表达，上调表达高峰均在12～72h，基因表达量最高值是对照组的2～30倍；mIgD基因的表达显著下调或无显著差异，基因表达量最低值出现在8～12h，最低值是对照组的o．0

3、2～o．2倍；TLR5M基因的表达无显著变化。在头。肾和脾脏组织中，除了TI。R5M、cxc、C-Lyz和mIgD4个基因其余9个基因的表达量显著高于鳃组织，且表达量最大值的出现时间均早于鳃组织。研究结果表明：腹腔注射免疫鳗弧菌全菌灭活疫苗能引起牙鲆脾脏、头肾和鳃免疫相关基因的快速变化。脾脏、头肾中基因的表达量大多显著高于鳃组织，且表达高峰值的出现早于鳃组织。注射免疫后，脾脏或头‘肾组织中TLR2、NF-*B和IL，6基因的表达量上调较快、较高，可作为注射免疫鳗弧菌全菌灭活疫苗效果的主要评价指标。本研究为牙鲆疫苗免疫效果的评价提供了理论依据。关键词：牙鲆；鳗弧菌；灭活疫苗；注射

4、免疫；免疫相关基因中图法分类号：S917文献标志码：A文章编号：1672—5174(2016)02一042—12DOI：lo．16441／j．cnki．hdxb．20150022引用格式：薛洁，宋晓青，邢婧，等．牙鲆注射免疫鳗弧菌灭活疫苗后13种免疫相关基因表达的变化[J]．中国海洋大学学报(自然科学版)，2016，46(2)：42—53．XUEJie，SONGXia0_Qing，XINGJing，eta1．ExpressionanalysisofthirteenimmunerelatedgenesoffIounder(Paralich—thysolivaceus)vaccin

5、atedwithformali”inactivatedvibrioanguillarum[J]．PeriodicalofOceanUniversityofchina，2016，46(2)：42—53．疫苗因具有无污染、无残留且不易引起耐药性等优点[1]，已经成为防治鱼类细菌性、病毒性疾病的有效方法。对于鱼类疫苗免疫效果的评价主要集中在鱼类血清及黏液抗体水平变化[2’4’5f、免疫相关酶活性[3’6]、淋巴细胞数量[3。5]、呼吸爆发[6]和补体活性[6。7]等免疫指标。近年来，从基因水平对疫苗免疫效果进行研究的报道也越来越多，Toll样受体(Toll—likereceptors

6、，TLRs)信号通路、淋巴细胞表面标志、免疫应答关键分子、细胞因子等在鱼类非特异性和特异性免疫应答中起重要调节作用的相关因子均是疫苗免疫后主要的检测指标[8-】3I。Toll样受体(Toll一likereceptors，TLRs)识别病原相关分子模式(Pathogen-associatedmolecu—larpatterns，PAMPs)，启动信号级联转导，TLR信号激活宿主免疫和前炎性基因的表达，引发针对所识别病原的免疫反应。而MyD88被许多实验证明除TLR3外介导绝大多数TLR信号转导途径。鱼类的主要组织相容性复合体MHCII类基因产物的主要功能是结合外源性抗原并呈递给C

7、D4+T细胞，从而激发一系列的特异性免疫应答反应[243；Hsp70在蛋白质的折叠、装配、转运和不可复性多肽的降解及其调控过程中起关键作用，与生物体的适应能力有着重要的相关性，其大量表达有助于维持细胞内稳态、改善细胞的生存能力和提高对环境胁迫或伤害的耐受性[3胡；干扰素丫(IFN丫)属于II型干扰素，除抗增殖活性外，其主要生*基金项目：国家重点基础研究发展计划(2012CBll4406)；国家科技支撑计划(2012BADl7802)；国家自然科学基金项目(31172429；31302216)