温度刺激和鳗弧菌感染对牙鲆hsp90基因表达的影响

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1、分类号学号ＭＺ１２４８８ＵＤＣ密级辕叫大孽＂ＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕击学隹冷文（专业型）溫度刺激和？弧菌感染对牙鲜Ｈｓｐ９０基因表达的影响生安志指导教师姓名：鞠辉明副教授，扬州大学，江苏扬州，２２５００９莫．照兰研究员，中国水产科学研究院黄海水产研究所，山东青為，２６６０７１申请学位级别：硕壬学科专业名称：兽医硕壬论文提交日期：２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年５月学位授予单位：扬州大学学位授予日期：２０１５年６月答辩委员

2、会主席；２０１５年５月温度刺激和鎮弧菌感染对牙鲜Ｈｓｐ９０基因表达的影晌ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｓｏｆＨｓｐ９０ｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄＶｉｂｎｏａｎｇｕｉｎａｒｕｍｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎＰａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓｏｌｉｖａｃｅｕｓ研究生：生安志学科：兽医硕±导师；鞠辉明副教授莫照兰硏究员扬州大学兽医学院２０１５年５月生安志Ｉ：温度刺激和饋弧菌感染对牙辑Ｈｓｐ９０基因表达的影响中文摘要’牙辑（化ｍ舱ｏ＆ｗｃｅｗ）

3、是我国的重要海水养殖鱼类，病害频繁发生影响该养殖品种的可持续发展一。热激蛋白（ｈｅａｔｓｈｏ化ｒｏｔｅｉｎｓＨＳＰｓ是ｐ，）类在有机体受到高温等逆境刺激后大量表达的伴侣蛋白，在环境胁迫和免疫反应中发挥重要作用，了解牙解热激蛋白的作用机制对疾病防治有重要的意义。本研究开展了牙奸Ｈｓｐ９０ａ和Ｈｓｐ９０ｐ基因在温度刺激和病原菌感染下表达变化，旨在为牙砰疾病控制提供理论指导。主要研究内容和结果如下：１．Ｈｓ９０基因在不同发育期牙解的表达分布：利用实时癸光定量ＰＣＲ９０ａｐ，检测Ｈｓｐ和Ｈｓ９？ｐ〇ｐ基因ｍＲ

4、ＮＡ在不同发育期牙辑（２０ｇＩＫｇ）的表达分布，结果显示，Ｈｓｐ９０ａ和Ｈｓｐ９０３在检测的不同发育期牙鲜的１３种组织（肝脏、脾脏、头肾、后肾、也、肌肉、皮｜肤、胃、肠、鲍、腹錯、脑和血液）中均有表达。在检测的不同发育期牙解中Ｈｓ９０３的ｐ｜表法水平整体高于Ｈｓｐ９０ａ；检测还发现在８月龄（２００ｇ±５０ｇ）牙解在肝、鲍、背皮、背肌、腹ＩＩ的Ｈｓｐ９０ａ表达量要显著高于其他发育期同组织的表达量（戶＜〇．〇５），而Ｈｓｐ９０３在各｜不同大小牙鲜的表达量也具有明显的差异。‘－２．ｓ９０基因表达的影响温度和媛弧

5、菌感染对牙辑Ｈｐ；选取８月龄牙解在５３２Ｃ刺激°－比后、（，牙鲜肝脏脾脏Ｈｓ９０ａ在高温２２３２Ｃ）的表达量急骤升高Ｈｓ９０ｐ，而ｐｐ在不同溫度刺激期间表达量变化较小°°；在１０Ｃ、２８Ｃ连续刺激化，Ｈｓｐ９０ａ和Ｈｓｐ９０的ｍＲＮＡｐ的表现为先升后降的趋势，Ｈｓｐ９０ａ在高温时的表达量变化幅度明显高于Ｈｓ９０。ｐｐ用媛弧菌感染８月龄牙鲜，在感染７２ｈ内，牙解脾脏Ｈｓｐ９０ａ和Ｈｓｐ９〇ｐ的表达量先降后升，Ｈｓｐ９〇Ｐ上升的幅度明显（於０．０５）。结果表明，Ｈｓｐ９０ａ对高温热应激的反应明显，Ｈｓｐ９〇在

6、对病原菌感染的反应明显。ｐ３．牙鲜Ｈｓ９０ａ的原核表达：将Ｈｓ９０ａ基因ＢＡＤ／ｌｌｌＡ质粒中ｐｐ克隆到ｐｇ，构建重组载体ｐＢＡＤ－ｓ／ＩＩＩＡＨ９０，并转入到大肠杆菌ＴｏｌＯ以阿拉伯ｇｐｐ感受态细胞中，经过糖诱导表ｅｒｎＢ达，对目的蛋白进行Ｗｅｓｔｌｏｔ检测Ｗ及做质谱表达分析验证，结果表明重组蛋白得到正确表达，为后续对Ｈｓｐ９０ａ蛋白的研究提供基础条件。关键词：Ｈｓｐ９０；组织分化温度刺激；病原感染；原核表达ｎ扬州火学硕十学依论文ＡＢＳＴＲＡＣＴ户ａ尸幻／／［知妙ｏ／／ｖ口ｃ£Ｕ５ｉｓ

7、ｏｎｅｏｆａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｍａｒｉｎｅｃｕｌｔｕｒｅｄｆｉｓｈａｎｄｔｈｅｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｉｔｓｃｕｌｔｕｒｅｅａｓｉｌｙａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｆｒｅｑｕｅｎｔｌｏｃｃｕｒｒｅｄｄｉｓｅａｓｅｓ．ＴｈｅｈｅａｔｓｈｏｃｋｙｒｏｔｅｉｎＨＳＰｓｓａｋｉｎｄｏｒｏｎｉ打ｓｗｃｈｈａｓａｎｎｃｒｅａｓｅｄｅｘｒｅｓｓｏｎａｆｔｅｒａｆｆｅｃｔｏｎｗｉｔｈｐｉｆｃｈａｐｅｈｉｉｐｉｉ（）ｈ，ｈｉｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ

8、ａｎｄｏｔｈｅｒａｄｖｅｒｓｉｔｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｕｎｄｅｒｓ１：ａｎｄｉｎ化ｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＰｏ／／ｖａｃ£ｗｓｓｇＨＳＰ，ｓａｃｔｉｏｎｉｓｃｒｕｃｉａｌｔｏｉｔｓｄｉｓｅａｓｅｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．Ｉｎｔｈ