盐度骤变对仿刺参hsp70及hsp90基因表达的影响.pdf

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1、第42卷第9期2012年9月中国海洋大学学报PERl0DICAI。0F0CEANUNIVERSITYOFCHINA42(9)：022～027Sept．，2012盐度骤变对仿刺参hsp70及hsp90基因表达的影响+于姗姗1，王青林1，孟宪亮1，董云伟∥，董双林1(1．中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室，山东青岛266003；z．厦门大学海洋与环境学院，福建厦门361005)摘要：为研究夏季暴雨导致的养殖池塘盐度变化对仿刺参(Apostichopusjaponicus)生理的影响，在实验室内模拟野外盐度变化，采用半定量RT-PCR的方法研究了其h

2、sp70、hsp90a及hsp90b基因的表达。实验中，盐度先以每6h降2．5的速度由30降至20；保持96h后，再以同样的速度由20升至30，随后在盐度为30条件下保持96h。在盐度变化过程中随机取样。hsp70和hsp90b基因在盐度降至20后表达量开始显著升高(P

3、重要响应因子。关键词：仿刺参；盐度；热休克蛋白中图法分类号：$917．4文献标志码：A文章编号：1672—5174(2012)09—022—06作为最重要的生态因子之一，盐度对仿刺参的行为、生长、繁殖有着直接的影响[I七]。目前虾池养殖已经成为仿刺参养殖的重要模式E4。5I。在虾池养殖过程中，养殖池塘水体交换由自然潮汐决定，一般情况下盐度会维持在相对稳定的范围，但在夏季暴雨过后盐度会骤降至20左右，并维持数天E6I。这种大范围的盐度变化，必然会对仿刺参带来消极的影响，严重时会导致仿刺参的大规模死亡，给仿刺参养殖业造成巨大的损失。有研究表明仿刺参适

4、宜生长的盐度为20～35，最适生长盐度为25～30[7]。盐度骤降会引起体腔液渗透压的改变从而产生渗透压胁迫，渗透压胁迫使细胞内离子代谢受到严重影响，进一步导致蛋白合成紊乱以及蛋白损伤[8。9]。因此，研究仿刺参对盐度变化的反应，对探讨不同盐度下仿刺参的生长及实际生产应用具有一定的指导意义。前期研究表明，仿刺参在渗透压胁迫下，其热休克蛋白(Heatshockprotein，Hsp)会随即被诱导产生[1引。热休克蛋白是一组具有重要生理功能、结构高度保守的蛋白质，在热胁迫、组织缺氧、渗透压胁迫、重金属污染等胁迫条件下都会大量产生。作为分子伴侣，Hsp

5、参与细胞中变性蛋白的重折叠，防止变性蛋白被降解[11。14]。Hsp70是Hsp家族的重要成员在调节环境胁迫的影响以及维持细胞内动态平衡过程中发挥了重要作用[1争17]。Hsp90也是Hsp家族的重要成员，是蛋白质成熟过程中的分子伴侣，在维持蛋白质的稳定结构，参与细胞周期调节，机体免疫和信号传导等过程中发挥重要作用E18_19]。之前的研究表明，Hsp70家族在仿刺参应对渗透压胁迫以及热胁迫过程中能发挥重要作用[10’2口21I，但有关Hsp90对盐度胁迫响应的研究很少。因此本实验模拟自然环境中盐度变化模式，选择hsp70、hsp90a及hsp9

6、0b3条基因(其中hsp90a与hsp90b分别是2条序列不同的hsp90基因)，进一步研究盐度骤变对hsp70及hsp90基因表达的影响，丰富仿刺参生理生态学理论，为保障仿刺参养殖提供科学依据。1材料与方法1．1材料1．1．1实验材料实验所需仿刺参(Apostichopusjaponicus)幼参采自山东省即墨市育苗场，平均体重为(0．43±0．11)g。由于夏季青岛养殖池塘的水温约为25℃，本实验选定25℃作为实验温度。购买的仿刺参转移至水槽后，以1℃·d叫逐渐升温至25℃。之后25℃暂养2周。暂养期间不问断充气，光照周期为14L：10D。水

7、源为沙滤自然海水，每天换水1／2，海水盐度为30左右。换水前对海水进行预加热，防止换水造成水族箱温度变化过大。每天16：00按仿刺参体重的5％投喂*基金项目：国家自然科学基金项目(30400333)；国家科技支撑计划项目(2006BAD09A01)；山东省优秀中青年科学家科研奖励基金计划项目(BS2009NY019)资助收稿日期：2011-09—11；修订日期：20120207作者简介：于姗姗(1987一)，女，硕士生。E-mail：heiseyoumoys@gmail．corn*★通讯作者：E-mail：dongyw@xmLl．edu．cn9期

8、于姗姗，等：盐度骤变对仿刺参(ApostichopusJnponff“5)矗5p70及hspgO基因表达的影响23青岛七好饲料有限公司生