大菱鲆肠道黏膜免疫屏障在鳗弧菌感染前后的表达谱研究

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1、分类号密级UDC单位代码10435硕士学位论文大菱鲆肠道黏膜免疫屏障在鳗弧菌感染前后的表达谱研究Transcriptomicprofilingrevealedthesignaturesofintestinalbarrieralterationandpathogenentryinturbot(Scophthalmusmaximus)followingVibrioanguillarumchallenge研究生姓名高成斌指导教师李超教授学科专业水产养殖学研究方向水产动物免疫学与基因组学中国.青岛二0一

2、八年六月Transcriptomicprofilingrevealedthesignaturesofintestinalbarrieralterationandpathogenentryinturbot(Scophthalmusmaximus)followingVibrioanguillarumchallengeThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMast

3、erofAgronomyGaoChengbin（MarineScienceandEngineeringCollege）Supervisor:LiChaoQingdao.ChinaJune,2018独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的

4、说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要大菱鲆（Scophthalmusmaximus）肠道黏膜免疫屏障在鳗弧菌（V

5、ibrioanguillarum）感染前后的表达谱研究摘要黏膜免疫系统作为宿主抵御病原菌感染入侵的第一道防线，尤其是对于终生生活在病原菌丰富的水生环境中的鱼类。肠道是与外界病原菌保持接触的最大的体表区域，并且在免疫防御炎症反应和病原菌感染中具有重要作用。本研究揭示了肠道可能是鳗弧菌（VibrioAnguillarum）的入侵门户，而为了表征大菱鲆肠屏障中的免疫成分以及相关的免疫活性，本实验第一次利用RNA-seq测序技术检测了大菱鲆在鳗弧菌感染后的肠道中三个时间点的基因表达谱。总共1220000

6、00条150bp的短序列组装成183101条平均长度为1151bp以及N50长度为232bp的长序列contig。对照组与感染后1h、4h和12h时处理组之间的基因表达分析揭示了2079个显著性表达基因，差异表达基因的富集和通路分析显示病原菌附着和识别、抗氧化和细胞凋亡、黏膜屏障修饰以及免疫活性和炎症反应在病原菌入侵和宿主验证应答反应中的中心地位。本研究报导了在大菱鲆黏膜免疫中几个新的基因表达模式，这些基因的表达模式在之前的研究中是被忽视的。首先，本实验鉴定鉴定并表征了大菱鲆g型溶菌酶基因（Ly

7、g1和Lyg2），并确定了他们在不同病原菌感染后的黏膜屏障中的表达模式。进化分析揭示了大菱鲆g型溶菌酶基因与半滑舌鳎（Cynoglossussemilaevis）的亲缘关系最近。同时，两种溶菌酶基因在感染之后表显出不同的表达模式，其中，Lyg2在鳗弧菌和海豚链球菌（Streptococcusiniae）感染后在黏膜组织中呈现显著的上体表达趋势，而Lyg1却表现一个下调表达的一般趋势。大菱鲆g型溶菌酶基因显著表达特征显示了其在宿主防御系统的第一道防线中抵御病原菌附着和入侵的关键作用。然后，本实验鉴

8、定了大菱鲆几丁质酶基因同时表征了其在鳗弧菌和海豚链球菌感染后黏膜组织中的表达模式。捕获到三个几丁质酶基因转录本（CHIT1、CHIT2和CHIT3），同时描述了它们在不同细菌感染后的黏膜屏障中的蛋白质结构和表达模式。通过进化分析发现大菱鲆几丁质酶基因与褐牙鲆（Paralichthysolivaceus）亲缘关系最近，另外，几丁质酶在所有检测组织中均广泛表达，其中CHIT1和CHIT2在肠道中表达水平最高，CHIT3则在皮肤中具有最高表达水平。最后，这三个基因在病原菌感染后表现出不同的表达模式。几