草鱼出血病灭活疫苗上调草鱼脾细胞主要免疫分子的表达.pdf

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1、细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2015，31(5177·论著·文章编号：1007—8738(2015)02—0177—05草鱼出血病灭活疫苗上调草鱼脾细胞主要免疫分子的表达奕志娟一，郝贵杰，袁雪梅，潘晓艺，徐洋，姚嘉赘，蔺凌云，尹文林，沈锦玉，(温州医科大学检验医学院，生命科学学院，浙江温州325035；浙江省淡水水产研究所，浙江省鱼类健康与营养重点实验室，浙江湖州313001)[摘要]目的探讨草鱼出血病灭活疫苗对草鱼脾脏中IgM、主要组织相容性复合体I(MHCI)、1型干扰素(IFNI)、补体3(C3)、白细胞介素1B(IL一1p)、

2、内凝集素(intelectin)相关基因表达的影响。方法用草鱼肾细胞系(CIK)培养草鱼呼肠孤病毒(GCRV)，并制备草鱼出血病灭活疫苗，用生理盐水稀释成5O倍和100倍，包括未稀释组及生理盐水对照共4组。分别腹腔免疫注射健康草鱼，各组分别于免疫后0、6、12、24、72h，取脾脏并抽提总RNA，采用实时荧光定量PCR(qRT—PCR)检测上述6种免疫相关基因mRNA表达。结果与生理盐水对照组相比，免疫注射不同剂量的草鱼出血病灭活疫苗均能刺激草鱼脾脏中6种主要免疫分子不同程度的表达上调，表明疫苗刺激草鱼机体启动了非特异性和特异性免疫应答。在3个疫苗免疫组中，intel

3、ectin、MHCI、IL．1B、C3基因的相对表达量都随着时间的推移出现先表达上调，后表达下调；基因IFN1的相对表达量在免疫后6h达到峰值，之后下降至正常水平；IgM的相对表达量在所检测时间内呈逐渐上调的趋势。结论草鱼出血病灭活疫苗均能诱导草鱼脾脏中免疫相关分子基因的表达上调。[关键词]草鱼出血病；草鱼呼肠孤病毒；灭活疫苗；免疫基因；实时荧光定量PCR[中图分类号]R392．11，s965．112，s941．41l[文献标志码]AInactivatedvaccineforhemorrhageofGrasscarpup-regulatestheexpressions

4、ofmajorimmune-relatedgenesinspleenofGrasscarpYIZhijuan一，HAOGuijie。，YUANXuemei，PANXiaoyi，XUYang，YAOJiayun，LINLingyun，YINWenlin，SHENJinyu，SchoolofLaboratoryMedicineandLifeScience，WenzhouMedicalUniversity，Wenzhou325035；ZhejiangInstituteofFreshwaterFisheries，ZhejiangProvincialKeyLaboratoryo

5、fFishHealthandNutrition，Huzhou313001，China【AbstractJ0bjectiveToinvestigatetheimpactoftheinjectionofinactivatedvaccineforhemorrhageofGrasscarpontheexpressionsofmainimmune-relatedgenesinspleenincludingimmunoglobulinM(IgM)，majorhistocompatibilitycomplexI(MHCI)，interferonI(IFN1)，complement3

6、(C3)，interleukin-113(IL-113)andintelectingenes．MethodsCtenopharyngodenjdeluskidneyfCIK)cellswereinoculatedwithGrasscarpreovJrusfGCRV)．Thenjnactivatedvaccinewaspreparedbyinactivatingvirussuspensionwithformaldehyde．Vaccinewas50-and100-timesdilutedwithnormaIsaline．Theexperimentsincludedfou

7、rgroups：undilutedgroup，50-timesdilutedgroup，100-timesdilutedgroupandnormalsalinecontrolgroup．ThenhealthyGrasscarpswiththeaveragebodymass(20±5)gwereintraperitoneallyinjectedwithvaccineornormalsalineseparatelyforeachgroup．Spleenswerecollectedatdiferenttimepointsafterinjection(0，6