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时间:2020-03-28
《波纹龙虾C-型凝集素PhLecA的基因克隆与表达.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、热带海洋学报JOURNALOFTROPICALOCEANOGRAPHY2016年第35卷第5期:29—37海洋生物学doi:10.11978/2015155波纹龙虾C.型凝集素PhLecA的基因克隆与表达木李斌,梁华芳,陈兆明,黄启幸,程志芬,陈仕坤广东海洋大学水产学院,广东湛江524088http-//www.jto.ac.cn摘要:C.型凝集素是存在于所有后生动物中的一类Ca2+依赖性糖蛋白,能够识别并结合细菌和真菌表面的糖类物质,在机体免疫防御中发挥重要作用。采用RT-PCR和末端快速扩增技术(rapidampl
2、ificationofeDNAends,RACE)首次克隆了波纹龙虾PanulirushomausC.型凝集素PhLecA的eDNA全长,共863bp,其中开放阅读框729bp,编码一个243个氨基酸残基的蛋白,其中含一个17个氨基酸残基的信号肽和一个CRD(carbohydraterecognitiondomain)结构域。通过半定量RT-PCR检测发现,PhLecA的mRNA广泛分布于波纹龙虾各个组织,胚胎期以及幼体期,其中在肝胰腺组织表达量最高,胃肠组织及复眼色素形成期次之。采用定量PCR方法对WSSV(whit
3、espotsyndromevirus)、哈维氏弧菌免疫刺激后波纹龙虾肝胰脏中的PhLecA转录水平检测,结果显示,波纹龙虾注射WSSV、哈维氏弧菌后,PhLecA表达量均发生了变化,总体趋势为先上调,然后下调至正常水平。研究显示,PhLecA可能在波纹龙虾对病毒、细菌的免疫应答过程中起重要作用。关键词:波纹龙虾;C.型凝集素;基因克隆;组织分布;免疫刺激中图分类号:P735.542文献标识码:A文章编号:1009.5470(2016)05.0029.09GenecloningandanalysisofanovelC—t
4、ypelectinPhLecAfromPanulirushomausLIBin,LIANGHuafang,CHANSiuming,HUANGQixing,CHENGZhifen,CHENShikunFisheriesCollege,GuangdongOceanUniversity,Zhanjiang524088,ChinaAbstract:C—typelectins(CTLs)arealargefamilyofproteinsthatexistinalldeuterostomia.CTLscanbindtocarboh
5、ydratemoietiesnormallyinacalcium-dependentmannerandplayimportantrolesinimmunedefense.TheeDNAsequenceofPanulirushomausLecA(PhLecA)wasobtainedusingrapidamplificationofeDNAendsmethod(RACE).Thefull—lengtheDNAsequenceofPhLecAwas863bp,whichcontaineda729bpcompleteopenr
6、eadingflame(ORF)encoding243aminoacids.ThededucedaminoacidsequenceofPhLecAhadasignalpeptidecontaining17aminoacidresiduesandacarbohydraterecognitiondomain(CRD).RT-PCRanalysisshowedthatthemRNAofPhLecAwaswidelydistributedinvarioustissuesintheembryonicperiodandthelar
7、valstage,withhighestexpressioninhepatopancreasandtheninstomach,intestineandeyepigmentformationstage.Real—timePCRanalysisindicatedthatPhLecAtranscriptslevelshowedsignificantchangeinhepatopancreasafterthelobsterwasartificiallychallengedwithwhitespotsyndromevirus(W
8、SSV)andVibrioharveyi,theoverallchangetrendofPhLecAtranscriptsfirstwentup,andthenwentdowntonormallevel.TheresultssuggestedthatPhLecAmightbeinvolvedintheimmuneresponsea
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