波纹龙虾C-型凝集素PhLecA的基因克隆与表达.pdf

《波纹龙虾C-型凝集素PhLecA的基因克隆与表达.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、热带海洋学报JOURNALOFTROPICALOCEANOGRAPHY2016年第35卷第5期：29—37海洋生物学doi：10．11978／2015155波纹龙虾C．型凝集素PhLecA的基因克隆与表达木李斌，梁华芳，陈兆明，黄启幸，程志芬，陈仕坤广东海洋大学水产学院，广东湛江524088http-／／www．jto．ac．cn摘要：C．型凝集素是存在于所有后生动物中的一类Ca2+依赖性糖蛋白，能够识别并结合细菌和真菌表面的糖类物质，在机体免疫防御中发挥重要作用。采用RT-PCR和末端快速扩增技术(rapidampl

2、ificationofeDNAends，RACE)首次克隆了波纹龙虾PanulirushomausC．型凝集素PhLecA的eDNA全长，共863bp，其中开放阅读框729bp，编码一个243个氨基酸残基的蛋白，其中含一个17个氨基酸残基的信号肽和一个CRD(carbohydraterecognitiondomain)结构域。通过半定量RT-PCR检测发现，PhLecA的mRNA广泛分布于波纹龙虾各个组织，胚胎期以及幼体期，其中在肝胰腺组织表达量最高，胃肠组织及复眼色素形成期次之。采用定量PCR方法对WSSV(whit

3、espotsyndromevirus)、哈维氏弧菌免疫刺激后波纹龙虾肝胰脏中的PhLecA转录水平检测，结果显示，波纹龙虾注射WSSV、哈维氏弧菌后，PhLecA表达量均发生了变化，总体趋势为先上调，然后下调至正常水平。研究显示，PhLecA可能在波纹龙虾对病毒、细菌的免疫应答过程中起重要作用。关键词：波纹龙虾；C．型凝集素；基因克隆；组织分布；免疫刺激中图分类号：P735．542文献标识码：A文章编号：1009．5470(2016)05．0029．09GenecloningandanalysisofanovelC—t

4、ypelectinPhLecAfromPanulirushomausLIBin，LIANGHuafang，CHANSiuming，HUANGQixing，CHENGZhifen，CHENShikunFisheriesCollege，GuangdongOceanUniversity，Zhanjiang524088，ChinaAbstract：C—typelectins(CTLs)arealargefamilyofproteinsthatexistinalldeuterostomia．CTLscanbindtocarboh

5、ydratemoietiesnormallyinacalcium-dependentmannerandplayimportantrolesinimmunedefense．TheeDNAsequenceofPanulirushomausLecA(PhLecA)wasobtainedusingrapidamplificationofeDNAendsmethod(RACE)．Thefull—lengtheDNAsequenceofPhLecAwas863bp，whichcontaineda729bpcompleteopenr

6、eadingflame(ORF)encoding243aminoacids．ThededucedaminoacidsequenceofPhLecAhadasignalpeptidecontaining17aminoacidresiduesandacarbohydraterecognitiondomain(CRD)．RT-PCRanalysisshowedthatthemRNAofPhLecAwaswidelydistributedinvarioustissuesintheembryonicperiodandthelar

7、valstage，withhighestexpressioninhepatopancreasandtheninstomach，intestineandeyepigmentformationstage．Real—timePCRanalysisindicatedthatPhLecAtranscriptslevelshowedsignificantchangeinhepatopancreasafterthelobsterwasartificiallychallengedwithwhitespotsyndromevirus(W

8、SSV)andVibrioharveyi，theoverallchangetrendofPhLecAtranscriptsfirstwentup，andthenwentdowntonormallevel．TheresultssuggestedthatPhLecAmightbeinvolvedintheimmuneresponsea