牡蛎过敏原crag 1二级结构和其b细胞与t细胞表位研究

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1、牡蛎过敏原Crag1二级结构和其B细胞与T细胞表位研究　　[摘要]目的分析牡蛎过敏原Crag1的二级结构及其B、T细胞表位，为探索基于抗原表位的免疫治疗奠定基础。方法从Uniprot数据库中获得牡蛎过敏原Crag1的氨基酸序列，通过DNAStarProtean软件，采用Garnier-Robson方法和Chou-Fasman方法分析其二级结构；采用Kyte-Doolittle法、Karplus-Schulz法、Emini法、Jameson-Wolf法综合分析Crag1主要的B细胞抗原表位。使用SYFPEITHI和NetMHC-Ⅱ在线网站

2、分析T细胞抗原表位。结果牡蛎过敏原Crag1的二级结构主要为α-螺旋，其B细胞表位接近覆盖Crag1氨基酸全序列；而T细胞优势表位位于第89～103、108～122、129～143位肽段。结论本研究分析牡蛎过敏原Crag1的B、T细胞优势表位，为日后Crag1的基础免疫学研究，如疫苗的研制、诊断试剂的制备和其抗原性改造等提供了理论依据。[关键词]牡蛎过敏原；Crag1；二级结构；B细胞表位；T细胞表位[中图分类号]R392.8[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2013）07（a）-0012-0516现今，食物导致过敏疾病的

3、发病率日益增高，给人们健康造成很大的威胁，其中对水产品过敏的人群比重相当大。甲壳类水产食品是八类常见食物过敏原之一[1]，所以对于海鲜产品过敏原的研究主要在指向于甲壳类动物过敏原，但海鲜水产品中软体动物也能引起过敏反应[2]。据研究报道，甲壳类动物与软体动物具有交叉过敏原[3-5]，但是关于软体动物过敏原的研究却远少于甲壳类动物的过敏原。牡蛎，软体动物类中最受欢迎的食物，在日本和世界其他沿海国家都是十分重要的海鲜食品。牡蛎不仅具有食用价值，而且具有较高的药用价值，同时是我国首批列为药食同源的保健疗效食品之一。但是作为保健品的牡蛎，却同时

4、是过敏性食品之一，它可引起各种超敏反应症状，累及皮肤、呼吸道和胃肠道，牡蛎的食用安全性令人担忧。因此，开展对牡蛎过敏原的研究显得极具现实意义。本研究着重分析软体动物过敏原——牡蛎的高亲和力表位，为进一步软体动物过敏原研究开启一扇重要之门，为设计表位改造，降低其过敏原性提供参考，也为目前治疗开发出新策略。牡蛎属于双壳类软体动物，在胃液中具有一定的耐消化性[6]，这可能是导致牡蛎致敏的原因之一。牡蛎的主要过敏原为Crag161，其性质为原肌球蛋白[7]。牡蛎能引起人致敏的前提是它具有抗原表位。抗原表位是过敏原抗原性的基础，是抗原分子中决定抗

5、原特异性的特殊化学基团，也是TCR/BCR和抗体特异结合的基本单位。分析B、T细胞表位，为疾病诊断、抗原表位的定点突变降低免疫原性、单克隆抗体的制备及表位疫苗的开发等打下基础。所以，本文拟采用生物信息学分析软件和互联网络服务器，分析牡蛎过敏原Crag1的二级结构和B、T细胞表位，为日后的科研开展提供理论指导。1材料与方法1.1Crag1的氨基酸序列牡蛎主要过敏原Crag1在Uniprot数据库中登录号为：Q96WY0。Crag1共有233个氨基酸，使用DNAStar软件中EditSeq模块估计分子量为：26.87kD。Crag1氨基酸序

6、列如下：NSARGFDTVNEKYQECQTKMEEAEKTASEAEQEIQSLNRRIQLLEEDMERSEERLQTATEKLEEASKAADESERNRKVLENLNNASEERTDVLEKQLTEAKLIAEEADKKYDEAARKLAITEVDLERAEARLEAAEAKVLELEEELKVVGNNMKSLEISEQEASQREDSYEETIRDLTQRLKDAENRATEAERTVSKLQKEVDRLEDELLAEKERYKAISDELDQTFAELAGY。1.2Crag1的二级结构分析应用DNAStar软件提供的Prot

7、ean模块，采用其中的Garnier-Robson[8]方法和Chou-Fasman[9]方法分析Crag1的二级结构。1.3Crag1的B细胞抗原表位分析16使用DNAStar软件中Protean模块进行B细胞抗原表位的分析。采用Kyte-Doolittle[10]法分析Crag1的亲水区；采用Karplus-Schulz[11]法分析Crag1骨架区的柔韧性；采用Emini[12]法分析Crag1中特定区域位于蛋白表面的可及性；采用Jameson-Wolf[13]法分析Crag1的抗原性指数。最后综合以上4项得出Crag1主要的B细

8、胞抗原表位。1.4Crag1的T细胞抗原表位分析使用SYFPEITHI[14]在线分析软件（http：//www.syfpeithi.de/Scripts/MHCServer.dll/EpitopePred