大肠菌群检测(三)重点.ppt

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1、牛乳大肠菌群复发酵实验BGLB液体接种操作实训目的进一步理解大肠菌群检测的操作流程了解大肠菌群液体接种方法·进一步熟悉无菌操作要点实训仪器与设备酒精灯、接种针、火柴、75%酒精棉、LST肉汤培养物、BGLB肉汤培养基实训步骤1、LST肉汤培养基的产气检查观察培养完毕的LST肉汤培养液，观察小倒管中是否有气体产生。若有气体产生，则疑似大肠菌群，需要进行BGLB肉汤培养基接种。LST肉汤BGLB肉汤结果1：10产气产气阳性1：100产气产气阳性1：1000产气产气阳性2、BGLB液体接种将产气的LST肉汤培养基进行液体接种。在酒精灯上灼烧接种环，从LST肉汤培养基中

2、挑取一环菌液，接种于BGLB肉汤培养基中，36℃培养48小时后。观察产气情况。液体接种操作要点：1、操作前消毒2、接种环灼烧完全，镍丝要烧红。3、棉塞夹于拿接种针手的无名指和小指之间4、打开棉塞后试管口要在酒精灯旁，避免杂菌进入。BGLB接种操作问题：1、如何进行LST肉汤培养基的产气检查？2、如何用接种针进行挑菌操作？3、液体接种过程中如何使用才能保证无菌状态？1、观察试管内的小倒管，如果小倒管有气泡存在或者小导管上漂，说明试管产气。2、首先点燃酒精灯，在酒精灯旁进行操作。其次接种前充分灼烧接种针，将镍丝烧红为止。接种时将试管放于酒精灯上方火焰外焰处，棉塞加于

3、无名指和小指之间。3、吸量管在使用前进行灼烧，拿管要求远离实训服，使用前检查是否包扎完好无玻璃外露。思考题：1、大肠菌群检测流程2、回顾初发酵试验步骤3、大肠菌群检测涉及到几种培养基？LST肉汤培养基的制备步骤、配方是什么？2、初发酵实验步骤1）称取25g固体样品，加入225mL无菌水中，均质制备成1：10样品溶液。2）用1只1mL无菌吸量管吸取1：10样品溶液，用无菌方法各取1mL，分别加入到3只LST肉汤培养基中。3）吸取1mL1：10样品溶液，加入到装有9mL无菌试管中摇匀，制备成1：100样品溶液。4）换1只吸量管各取1mL1：100溶液，加入到3只LS

4、T肉汤培养基中。5）吸取1mL1：100样品溶液，加入到装有9mL无菌试管中摇匀，制备成1：1000样品溶液。6）换1只支吸量管各取1mL1：1000溶液，加入到3只LST肉汤培养基中。7）36度±1度，48小时±2小时培养后观察3、2种培养基，LST肉汤培养基和BGLB肉汤培养基。LST肉汤培养基：胰蛋白胨或胰酪胨20.0g氯化钠5.0g乳糖5.0g磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75g磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75g月桂基硫酸钠0.1g蒸馏水1000mLpH6.8±0.2将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃

5、高压灭菌15min。