大肠菌群检验重点.ppt

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1、大肠菌群检测检验程序检样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种至月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤管不产气产气煌绿乳糖胆盐（BGLB)肉汤不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查MPN表报告结果36℃±1℃48h±2h36℃±1℃48h±2h检样初发酵复发酵报告检样固体样品：在电子天平上称取25g+225mL0.85%灭菌生理盐水液体样品：直接取用固体样品存放罐固体样品称量用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按“去皮”键，当显示屏上的数字显示为“0”时，可开始称量。去皮

2、键初发酵取（带上试管架）：单料管9支装有0.85%灭菌生理盐水的生理盐水灌1个装有9mL0.85%灭菌生理盐水的试管3支操作步骤1.用酒精棉消毒操作台操作步骤2.用酒精棉消毒双手操作步骤3.点燃酒精灯操作步骤4.为装有培养基的试管编号为试管编号编号原则：固体样品：1、0.1、0.01（表示加入的固体样品为1g、0.1g、0.01g）液体样品：10、1、0.1（表示加入的液体样品为10mL、1mL、0.1mL）双料单料1110.10.10.10.010.010.011010101110.10.10.1用量筒量取225mL0.85%灭菌生理盐水至稀释瓶中。（注意：稀释瓶、带塞

3、锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有0.85%灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围15cm的范围内）固体样品称量后处理液体样品液体样品：直接吸取1mL样液至单料管中1110.10.10.11mL1mL1mL注意：加样液后不能振摇试管。液体样品：吸取25mL液体样品至稀释瓶中，加入225mL0.85%灭菌生理盐水，盖上盖子，混匀；从稀释瓶中分别吸取1mL被稀释10倍的饮用水至最后三支单料管中。液体样品0.10.10.125mL1mL1mL1mL注意：加样液后不能振摇试管。固体样品：从稀释瓶中吸取1mL样液至装有9mL0.85%灭菌生理盐水的试管中，盖上盖子，混匀；从该试管

4、中分别吸取1mL样液至最后三支单料管中。0.010.010.011mL1mL1mL1mL注意：将样液加入装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。样液加入培养基后不能振摇试管。观察初发酵结果取回初发酵结果，观察。确定有几支初发酵管内的小倒管中有气泡产生。根据对初发酵结果的观察，有几支小倒管中有气泡，则取几支煌绿乳糖胆盐复发酵管。内有小倒管复发酵在有气泡的初发酵管后的相应位置放上复发酵管用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相对应的复发酵管中。（注意接种环的灼烧、冷却）将接种好的初发酵管和复发酵管放入恒温培养箱。注意选择设置为36℃±1℃的培养箱。36℃±1℃48h±2h观察复发

5、酵结果，小倒管内有气泡为阳性（+），无气泡为阴性（-）。+--+---+-注：初发酵管产气，复发酵结果可能产气，也可能不产气。查MPN表11111检验结果记录检样量初发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数10mL／／／／／／／1g（或mL）+--+--10.1g（或mL）++-+--10.01g（或mL）-+--+-10.001g（或mL）／／／／／／／培养条件温度：时间：温度：时间：检验结果MPN/g=1.1备注标准值：单项检验结论：符合（不符合）检验人：检验日期：固体样品检验结果记录检样量初发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数10mL+--+--11g（或mL）++

6、-+--10.1g（或mL）-+--+-10.01g（或mL）／／／／／／／0.001g（或mL）／／／／／／／培养条件温度：时间：温度：时间：检验结果MPN/mL=0.11备注标准值：单项检验结论：符合（不符合）检验人：检验日期：液体样品小结本次检验操作共取：双料管3支，单料管6支，装有灭菌生理盐水的锥形瓶1个，装有9mL灭菌生理盐水的试管1支（固体样品），复发酵管若干支（根据初发酵结果）本次检验操作共用：固体样品：10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接种环液体样品：25mL移液管1支，10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接种环