大肠菌群检测操作规范培训.ppt

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1、大肠菌群检测操作规范培训质量管理部目录一、细菌介绍二、大肠杆菌生物学特性三、大肠杆菌检测仪器、设备四、检测培养基及试剂五、检测前培养基准备六、接种培养七、MPN单位介绍八、检测注意事项一、细菌介绍细菌是单细胞原核微生物，个体微小（细胞直径约0.5μm,0.5-5μm），结构简单，以二等分裂方式繁殖。在自然界中，细菌分布最广、数量最多。1、细菌的形态细菌个体微小、形态各异球菌杆菌弧菌与弯曲菌螺旋菌及螺旋体不规则形弧菌2、细菌的结构细菌的基本结构包括：细胞壁、细胞膜、间体、细胞浆、核糖体、细胞质。细菌的附属结构包括：

2、质粒、荚膜、鞭毛、菌毛和芽胞。3、细菌的繁殖细菌最普遍、最主要的繁殖方式：二分分裂繁殖。在分裂前先延长菌体，染色体复制为二，然后垂直于长轴分裂，细胞赤道附近的细胞质膜凹陷生长，直至形成横隔膜，同时形成横隔壁，这样便产生两个子细胞。4、细菌的菌落单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团－菌落。细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。细菌的菌落图二、大肠杆菌生物学特性大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需

3、氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。主要包括埃希氏菌、柠檬酸细菌、肠杆菌、克雷伯氏菌等，均属于肠杆菌。大肠菌群以大肠埃希氏菌为主，是革兰氏阴性、两端钝圆的杆菌，无芽孢，以周生鞭毛运动或不运动。最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。1、大肠杆菌平板菌落照片2、大肠杆菌革兰氏染色照片3、大肠杆菌微菌落照片4、大肠杆菌透射电镜照片5、大肠杆菌扫描电镜照片6、大肠杆菌分裂照片三、检测仪器、设备冰箱：0～4℃恒温培养箱：36±1℃恒温水浴锅：46±1℃微生物显微镜架盘药物天平：0g

4、～500g，精确至0.5g三角瓶：500ml灭菌吸管：1ml、10ml灭菌平皿：直径90mm试管：18×180mm四、检测培养基及试剂乳糖胆盐发酵管伊红美蓝琼脂乳糖发酵管革兰氏染色液生理盐水乳糖胆盐发酵管：用于大肠菌群的测定。35g乳糖胆盐于1升蒸馏水中，溶解，分装于发酵试管中，放入小倒管，115℃15分钟高压灭菌。双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其它成分加倍。乳糖发酵管：大肠菌群证实试验用。30g乳糖于1升蒸馏水中，溶解，分装于发酵试管中，放入小倒管，115℃15分钟高压灭菌。伊红美兰琼脂：用于大肠菌群的固体平板

5、检测。37.5g于1升蒸馏水中，摇匀，加热煮沸，121℃15分钟高压灭菌。五、检测前培养基准备检查预先经过灭菌处理的乳糖胆盐发酵培养基小导管内是否有气体。按产品品种将培养基分别放在试管架内，同时将9ml0.85%灭菌盐水管也放入相应的试管架内。六、接种培养（一）酸牛奶系列产品酸牛奶系列产品接种单料乳糖胆盐发酵培养基9支管，分别接种样品量为1ml(原浓度)3支，0.1ml(10-1浓度)3支，0.01ml(10-2浓度)3支。1、1ml接种培养在无菌条件下，用1ml灭菌吸管吸取1ml样品试液于含有9ml0.85%灭

6、菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:10的稀释液；同时分别吸取1ml样品试液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。2、0.1ml接种培养另换1根1ml灭菌移液管吸取1:10的稀释液1ml于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:100的稀释液；同时分别吸取1ml1:10稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。3、0.01ml接种培养另换1根1ml灭菌移液管分别吸取1ml1:100稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。4、接种过程操作录像检测单

7、料大肠检测.MPG5、接种后培养将接种完的试管连同试管架一起置于36±1℃的培养箱内培养24±2h，观察乳糖胆盐发酵管的变化情况。6、结果查询并记录若所有乳糖胆盐发酵管都不产酸产气，则报告大肠菌群阴性。若有产酸产气，则要做证实试验。（二）活性乳酸菌饮料系列产品活性乳酸菌饮料系列产品接种双料乳糖胆盐发酵培养基3支管，单料乳糖胆盐发酵培养基6支，分别接种样品量为10ml3支，1ml3支，0.1ml3支。1、10ml接种培养在无菌条件下，用1ml灭菌吸管吸取1ml样品试液于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制

8、成1:10的稀释液；同时用10ml灭菌吸管分别吸取10ml样品试液于3支双料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。2、1ml接种培养另用1ml灭菌移液管分别吸取1ml样品试液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。3、0.1ml接种培养另换1根1ml灭菌移液管分别吸取1ml1:10稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。4、接