大肠菌群检测(MPN法).ppt

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1、大肠菌群计数MPN法一群在36℃培养48h可发酵乳糖产酸产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。并非分类学概念，在生化及血清学方面并非完全一致。一般认为包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。大肠菌群（Coliforms）指在44.5℃培养24-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少

2、使用“粪大肠菌群”，如NMKL。与大肠菌群一样，并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。粪大肠菌群（Fecalcolifoms）一群在44.5℃发酵乳糖、产酸产气、IMViC生化试验为++--或-+--的革兰氏阴性无芽孢杆菌。分类学概念：肠杆菌科、埃希氏菌属是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部位时，可引起感染。O抗原（菌体抗原，1

3、50个）K抗原（荚膜抗原，90个）H抗原（鞭毛抗原，50个）大肠杆菌（Escherichiacoli）致泻性大肠杆菌能侵入肠粘膜上皮细胞，引起食物中毒的大肠杆菌。产毒性大肠杆菌（ETEC)——肠胃炎、旅行性腹泻致病性大肠杆菌（EPEC)——婴儿腹泻肠出血性大肠杆菌（EHEC)——出血性结肠炎（O157：H7；O104：H4；O111；O26等）侵袭性大肠杆菌（EIEC)——杆菌性痢疾粘附性大肠杆菌（EAEC)——急慢性腹泻大肠杆菌（Escherichiacoli）ETECEIECEHEC大肠菌群耐热大肠菌群（粪大

4、肠菌群）大肠杆菌O157：H7；O104：H4等大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的关系是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，粪便中既有正常肠道菌，也可能有肠道致病菌（如大肠杆菌O157、沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等），因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。大肠菌群数量越多则肠道致病菌存在的可能性就越高，但两者之间并不总是呈平行关系。通常情况下，粪大肠菌群与大肠菌群，在人和动物粪便中所占的比例较大，而且由于在自然界容易死亡等原因，粪大肠

5、菌群的存在可认为食品直接或间接的受到了比较近期的粪便污染。因而，粪大肠菌群在食品中的检出，与大肠菌群相比，说明食品受到了更为不清洁的加工，肠道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。食品卫生学意义检样稀释月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）36±１℃，24~48±2h不产气产气煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）36±１℃，24~48±2h不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性报告GB4789.3-2016（第一法）大肠菌群计数MPN法流程图大肠菌群计数MPN法示意图复发酵产气管10mLBGLB接种25g移1ml移1ml225ml生理

6、盐水均质器各1ml初发酵各1ml各1ml9ml生理盐水9ml生理盐水各10mLLST固体样品液体样品225ml生理盐水玻璃珠25mL其他相同0将产气的试管内样品接种到BGLB肉汤LST不产气（-）小导管里无气泡LST产气（+）MPN法大肠菌群计数MPN法操作根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表MPN：MPN（最可能数）是表示样品中活菌密度的估测。因此MPN值只是活菌密度的估算值，并不是样品中活菌数的真值。根据大肠菌群阳性管数,查MPN检索表，报告每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。结果报告归纳总结培养基

7、主要成分作用①月桂基磺酸钠能抑制革兰氏阳性菌的生长，同时比胆盐的选择性和稳定性好。由于胆盐与酸产生沉淀，沉淀有时候会使对产气情况的观察变得有些困难；②乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌；③胰蛋白胨提供基本的营养成分；④LST肉汤是国际上通用的培养基，与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越性。月桂基磺酸盐胰蛋白胨（LST）归纳总结培养基主要成分作用①胆盐可抑制革兰氏阳性菌。②煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。③乳糖是大肠菌群可利用发酵的

8、糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。④发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有沉淀。煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）归纳总结注意事项目前很多产品大肠菌群标准要求单位为MPN/100mL（g），同2010版检测结果单位MPN/100mL（g）不一