大肠菌群计数含MPN表

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1、大肠菌群计数是一种估计悬浮在水溶液中活菌数的方法。一般分几组进行,每一组各有数重复,分别以渐次的方式加入不同量的待测水溶液于培养液中进行培养,随后观察每一组中的试管是否有菌生长,然后再利用统计表估计菌数。例如水中coliform数的测定,将待测水溶液以10ml,1ml及0.1ml的量分别加入各组,每组三重复,经培养后观察coliform是否有生长,统计有菌生长的管数,以统计表统计菌数。活菌的浓度可利用MPN的方式来估计,方式简单,可分为下列两步骤:在培养基中作数个重复稀释;记录有菌生长的试管。若试管中无生长,则可能代表连一支菌都没有生长。从统计观点,MP

2、N这个方法是一种非常没效率的方式,因为每一试管与培养皿表面生长的菌数只有很小部分符合。然而MPN的好处有以下:若菌无法长在固态培养基时,便可使用;若菌的生长的动力学具有很大变化,便可使用:假设某些菌会会立即且迅速的生长,且会在固态培养基产生很大的菌落,且与我们要的菌落接触到或盖过时;因为较少且具高度游动性或快速生长的菌,可能形成小菌落,因而其数量是很多而导致无法计数;假如非我们所要菌存在,或无筛选的方法存在时,便可使用。虽然有污染的细菌可以大量生长,但仍可藉由我们所要看的菌产生特定的产物来估计;假如琼脂或其他固化材料有某些因素会干扰我们计数时,便可使用 

3、大肠菌群MPN表正反应试管数MPN/ml(g)95%信赖界线0.1ml0.01ml0.001ml下限上限000<3  0013<590103<513020---      1004<520101712111071231111133612011336      2009136201143372101534421120789220214472212810150230---      3002341203013971303026415380310437210311751423031212030380      3209315380321153044032221

4、035470330240361,300331460712,4003321,1001504,800333>1,100>150>4,800      说明:若稀释倍数为10,100,1000倍(即每mlLST中0.1,0.01,0.001ml(g)之检体),且LST均产气(正反应试管数3-3-3),经接种至EC,而其产气试管数为3-1-0,对照MPN为43,即为该检体大肠杆菌MPN数为43/ml(g)。若稀释倍数为原液,10,100倍(即每mlLST中含1,0.1,0.01ml之检体而EC接种之正反应试管数亦为3-1-0,则该检体大肠杆菌MPN数为43÷10

5、=4.3/ml。若稀释倍数为100,1000,10000倍时,结果同上,则该检体大肠杆菌MPN数为43×10=430/ml,其余类推。计算公式:×中间试管之稀释倍数=MPN/g(ml)平板计数法:采用常规涂布平板法,37℃24h后计数。培养基为营养琼指和伊红美兰琼脂。多管发酵法:采用五管法,培养剂为液体EC培养基。细菌总数:采用AODC法,具体操作按徐怀恕方法进行。活菌直接计数:采用Kogure等方法:向水样加入0.002%萘啶酮酸和0.025%酵母膏,在37℃下培养6-24h,加入甲醛(最终浓度为2%)固定,再按AODC法镜检计数。

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