食蟹猴——猪异种体细胞核移植胚胎的构建.pdf

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1、南方农业学报JOURNALOFSOUTHERNAGRICULTURE2013．44(9)：1547—1551ISSN2095—119l：CODENNNXAABhttp：Ilwww．nfi”b．cnDOI：10．39696：issn．2095-1191．2013．9．1547食蟹猴一猪异种体细胞核移植胚胎的构建梁明明，权利，黄高波，孙如玉，许惠艳，卢晟盛+(广西大学动物科学技术学院，南宁530005)摘要：【目的】探索食蟹猴一猪异种核移植胚胎的发育能力，为食蟹猴异种核移植胚胎干细胞的构建奠定基础。【方法】以食蟹猴和猪胎儿的耳部成纤维细胞为供体，猪MII期去核卵母细

2、胞为受体，构建异种核移植重构胚，并从核移植融合／激活方式、培养液两个方面进行优化。【结果】70枚食蟹猴一猪异种核移植胚胎中，有49枚分裂(70．o％)，与猪同种核移植胚胎的分裂率(76．6％)无显著差异；使用微卫星引物D15S823对食蟹猴一猪异种核移植胚胎进行遗传学鉴定，均能扩增获得D15S823条带(350bp)；食蟹猴一猪异种核移植胚胎融合后1h的染色体早熟凝集率(24．2％)显著低于猪同种核移植胚胎(44．7％)和猪孤雌激活胚胎(100．0％)，通过使用无Ca2+融合液能够显著提高染色体早熟凝集率(48．2％)；在PZM一3、HECM．10和HECM一1

3、0+10％FBS3种培养液中，食蟹猴一猪异种核移植胚胎的分裂率无显著差异。【结论】食蟹猴体细胞核能够在猪MII期去核卵母细胞胞质中发生核重塑，并发育到8．细胞阶段。关键词：食蟹猴；猪；异种核移植；胚胎发育中图分类号：Q813．2文献标志码：A文章编号：2095—1191(2013)09—1547—05ConstructionofclonedcynomolgusmonkeyembryosusingenucleatedpigoocytesLIANGMing—ming，QUANLi，HUANGGao-bo，SUNRu-yu，XUHui-yan，LUSheng—shen

4、g+(CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China)Abstract：【Objective]ThedevelopmentabilityofclonedcynomolgusmonkeyembryousingenucleatedpigoocyteswasstudiedtoprovidereferencesforconstructingiSCNTembryonicstemcellsofcynomolgusmonkey．【Method]Cynomol—gusmonkey

5、andpigskinfibroblastswereusedasdonorcellsforreconstructionwithenucleatedpigoocytes．Theprocesswasoptimizedfromtwoaspectsofnucleartransplantationfusionoractivationandculturemedia．【Result】Among77clonedcynomolgusmonkeyembryos，therewere49cleavedembryos．Nosignifcantdifferencewasfoundbetwee

6、nmonkey—pig(M／P)-iSCNT，andpig—pig(PP)一SCNTembryosincleavagerate(70．0VS．76．觎，respectively；pm．05)．D15S823stripe(350bp)wasamplifiedusingmicro—satelliteprimerD15S823．M／P—iSCNTdisplayedlowerrateofprematurechromosomecon—densation(PCC)after1hrfusion(24．2％)comparedwiththatofpignucleartransfe

7、rembryos(44．7％)andpigpartheno—geneticactivationembryos(100．0％)．ElectroporationinCa“freefusionmediumresultedintheincreasedPCCrate(48．2％)．Noapparentdifferenceincleavageratewasfoundamongporcinezygotemedium一3(PZM一3)，HamsterEmbryoCultureMedium一10(HECM一10)andHECM一10+10％FBS．【Conclusion】Insa

8、m，porcineoop