陆川猪脂蛋白脂酶基因的克隆与序列分析.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgrieuhureISSN2095—1191；CODENNNXAABDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．6．1074陆川猪脂蛋白脂酶基因的克隆与序列分析黄艳娜，李莉，何少婧，韦玲静，梁明振，兰干球，蒋钦杨+(广西大学动物科学技术学院，南宁530005)摘要：【目的】对陆川猪脂蛋白脂酶(LPL)基因进行克隆与序列分析，为后期开展LPL基因表达与陆川猪肌内脂肪沉积的相关性研究奠定基础。【方法】根据GenBank中已公布的猪LPL基因序列设计引物，以陆

2、川猪背最长肌组织总RNA为模板，利用RT—PCR扩增其LPLY基因，测序结果用Lasergene7．0软件进行序列分析，用MEGA6．0软件进行同源性比较及构建系统进化树，同时利用在线蛋白质结构分析软件(PMP)预测陆川猪LPL蛋白二级结构。【结果】成功克隆获得陆川猪LPLY基因编码区长1437bp，与GenBank中已公布普通猪、大白猪、杜洛克猪、通城猪、贵州白香猪的基因同源性分别为99．6％、99．7％、99．7％、99．7％和99．4％。陆川猪LPL基因第760位点存在特有的碱基A，该突变导致缬氨酸突变为蛋氨酸。由基于

3、LPL基因碱基同源性构建的物种系统进化树可知，广西陆川猪与大白猪的遗传距离最近，其次是山羊，最远的是小鼠。蛋白二级结构预测结果表明，陆川猪的LPL蛋白二级结构包含有N一端结构域和C一端结构域两个区域，且存在PLAT／LH2。【结论】LPL基因可作为研究陆川猪脂肪沉积的主要候选基因之一。关键词：陆川猪；脂蛋白脂酶基因；克隆；序列分析；同源性；蛋白二级结构中图分类号：$828．89文献标志码：A文章编号：2095—1191(2014)06—1074—05IjeneclonlnRancIseqUenceanalysis0I11DO

4、Droteln11Daseln』11●1l●n1●·●l●●LuchuanpigHUANGYan-na，LILi，HEShao-jing，WEILing-jing，LIANGMing-zhen，LANGan—qiu．JIANGQin—yang+(CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China)0引言【研究意义】陆川猪是被列入国家级地方品种遗传资源名录具有优质肉质的品种之一(张莲英和苏家联，2011)，其肉质性状表观指标如肉色、

5、肌内脂肪、肌纤维、系水力等在国内已有文献报道(张家富等，2010；何若钢等，2011)，但迄今为止鲜见陆川猪优质肉质性状形成分子机制的研究报道。在众多调控脂肪代谢酶中，脂蛋白脂酶(Lipoproteinlipase，LPL)是调控脂肪代谢的关键酶之一(Vosh01eta1．，2009)。因此，对陆川猪LPL基因进行克隆及序列分析，可为下一步收稿日期：2014—03—25基金项目：广西大学科研基金项目(XBZl30087)作者简介：*为通讯作者，蒋钦杨(1981一)，博士，副教授，主要从事动物遗传育种与繁殖研究工作，E—mai

6、l：jiangqinyang@126．coin。黄艳娜(1980一)，博士，主要从事动物营养与肉质调控研究工作，E—maihhuangyn@gxu．edu．en一一一～一一一一一一一一一一～一一～一～～一一一一一一一一一一一一～～一～一一．一～一一一一她～一一一一～～～一～一一一一～一～一一～一一一～～～．一～～一～一一一一一一一一一～一一～一一一～一～一一一～～一一一一删～幽一一～～一～～一一一惭～一一～一～～一一一一一～一．Ⅲ一一玳扎一一¨妣；；一岫删_重黑翟蒜砂罂曲州需吼～一一一一一一一一一一～一一舭一一～～～一～．一

7、一～一一脚6期黄艳娜等：陆川猪脂蛋白脂酶基因的克隆与序列分析·1075·研究LPL基因表达与陆川猪肌内脂肪沉积的相关性奠定基础。【前人研究进展】动物机体中脂肪的合成与分解速度，特别是甘油三酯和脂肪酸的转运速度决定了动物组织沉积脂肪的能力。LPL在脂质代谢与转运过程中发挥着重要作用，可将血液中的乳糜微粒和极低密度脂蛋白核心的甘油三酯催化分解为甘油和游离脂肪酸(Meadeta1．，2002)。现已从人类(Wioneta1．，1987)及牛(Sendaeta1．，1987)、鸡(Coopereta1．，1992)、猪(Harbit

8、zeta1．，1992)等动物中克隆获得LPL基因。在肉猪方面，国内已有学者针对地方品种猪LPL慕因进行克隆，如贵州白香猪(赵佳福等，2012)，期望通过研究LPL基因而深入了解其在猪肌内脂肪沉积方面的功能，达到有效调控畜禽肉品质、机体膘情、体重等目的(单体中等，2006)。【本研究切人点