广西三黄鸡PPARγ基因克隆及实时荧光定量PCR的建立.pdf

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1、南方农业学报JOURNAL0FSOUTHERNAGRICULTURE2013，44(8)：1377—1381ISSN2095—1191；CODENNNXAABhttp：Ilwww．rdhyxb．cnDOI：10．39690：issn．2095—1191．2013．8．1377广西三黄鸡删R谨因克隆及实时荧光定量PCR的建立彭广南，蒋钦杨+，王晶，郭亚芬，兰干球，蒋和生(广西大学动物科学技术学院，南宁530005)摘要：【目的】克隆广西三黄鸡过氧化物酶体增殖物激活受体^y(PPART)基因，建立该基因的实时荧光定量PCR，为后续开展广西三黄鸡PPAR馑因组织表达谱及品种间表达差异研

2、究奠定基础。【方法】根据GenBank已公布的鸡PPART；基因序列保守区域，用Oligo6．0软件设计合成1对引物，以广西三黄鸡脂肪总RNA为模板，用RT．PCR从广西三黄鸡克隆PPAR幢枣因。以携带脚—庳}因片段的重组质粒为标准品，建立基于SYBRGreenI染料法的实时荧光定量PCR标准曲线。【结果】广西三黄鸡黜谴因的编码区序列(CDS)长1428bp，编码475个氨基酸；与GenBank已公布的鸡PPAR—湛因(AFl63811)参考序列比对，其同源性为99．7％，存在4个位点碱基突变，但均为无义突变。广西三黄鸡PPAR7基因的实时荧光定量PCR标准曲线方程为：y=一3．

3、568x+28．50，扩增效率为1．907，实时荧光定量PCR扩增产物的溶解曲线峰单一。【结论】鸡PPAR馑因在进化中比较保守；建立的广西三黄鸡P附R馑因实时荧光定量PCR是可行的。关键词：广西三黄鸡；弭)AR谴因；克隆；同源性；实时荧光定量PCR；溶解曲线中图分类号：$831．89文献标志码：A文章编号：2095—1191(2013)08—1377—05J¨●’●●●n··●1Ulonlng0loeroxlsomeOrOllterator-acnvatedreceptorsaama(PPAR们geneinGuangxiSanhuangchickenanditsestablish

4、mentofreal-timequantitativePCRPENGGuang—nan，JIANGQin-yang+，WANGJing，GUOYa-fen，LANGan—qiu，JIANGHe—sheng(CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China)Abstract：【Objective】Theaimofthepresentstudywastoclonetheperoxisomeproliferator—activatedreceptor_y(PPARy)geneandesta

5、blishitsreal—timefluorescencequantificationPCRinordertoprovidereferencesforfurtherre．searchontissueexpressionprofileofPPAR7andexpressiondifferencesamongdifierentvarieties．【Method】Inthisexperi-ment，accordingtotheconservativeregionofPPAR7geneinGallusgallusregisteredinGeneBank，apairofprimerswasd

6、esignedandcomposedbyOligo6．0．WiththetotalRNAfromGuangxiSanhuangchickenasthetemplate，PPAR7genewasamplifiedusingRT-PCR．TheplasmidscarryingpartialsequenceofPPARVgenewereusedtoestablishthestandardcurveofreal—timefluorescencequantitativePCRusingthemethodofSYBRGreenI．【Result】TheoveralllengthofcDNAs

7、equenceofPPAR7gene，clonedfromGuangxiSanhuangchicken，was1428bpwith475aminoacids．Ithad99．7％ho—mologywiththereferencesequence．Therewere4sitenonsensemutations．Thestandardcurvewithonlyonepeakwasy2—3．568x+28．50．Theamplificationefficiencywas1．907．【C