组织培养的培养条件.doc

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1、组织培养的培养条件在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培养基组成、PH值、渗透压等各种化学环境条件都回影响组织培养育苗的生长和发育。、温度(temperature)因为温度是植物组织培养中的重要因素，所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组织培养都是在23〜27°C之间进行，一般采用25±2°CO低于15°C时培养，植物组织会表现生长停止，高于35°C时对植物牛长不利。但是，不同植物培养的适温不同。白鹤非的最适温度是20°C.月季是25〜27°C、番茄是28°

2、CO温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以28°C为最好，在12°C以下，33°C以上形成率皆最低。不同培养冃标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30°C以下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率比在25%以下的高。桃胚在2〜5€条件进行一定时间的低温处理，有利于提高胚培养成活率。用35°C处理草莓的茎尖分生组织3〜5d,可得到无病毒苗。二、光照(light)组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光照时间方面：1、光照强度(li

3、ghtintensity)光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的研究情况看，光照强度对外植物体、细胞的最初分裂有明显的影响。一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。2、光质(lightwave)光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化出愈伤组织。但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15天后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。3、光周期(light

4、period)□□试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养,最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，对短H照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而在长日照下产牛愈伤组织，有时需要暗培养，尤其是一些植物的愈伤组织在暗培养下比在光下更好。如红花、乌饭树的愈伤组织。三、湿度(humidity)湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件，容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂含量的影响。在冬季应当适当减少琼脂用量，否则，将使培养基干硬，以致不利于外植体接触或插进培养基

5、，导致生长受阻。封口材料直接影响容器内湿度情况，但封闭性较高的封口材料易引起透气性受阻，也会导致植物生长发育受影响。环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求70%-80%的相对湿度，常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时，易引起棉塞长霉，造成污染。四、渗透压(penetratingpressure)培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此，而影响到渗透压的变化。通常1-2个

6、大气压对植物牛长有促进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用，而5-6个人气压植物生长就会完全停止，6个人气压植物细胞就不能生存。五、PH值不同的植物对培养基最适PH值的要求也是不同的（见表），大多在5-6.5左右，一般培养基皆要求5.8,这基本能适应大多数植物培养的需要。PH值适度因材料而异，也因培养基的组成而不同。以硝态氮作氮源和以鞍态氮作氮源就不一样，后者较高一些。一般来说PH值高于6.5时，培养基全变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低PH值（约0.2-0.3个PH值）

7、因此在配制时常提高PH值0.2-0.3单位。PH值大小调节可用0.1M的NaOH和0.1M的HC1来调整。lml的NaOH可使PH值升高0.2单位，1ml的HC1可使PH值降低0.2单位。调节时一定要充分搅拌均匀。六、气体(gas)氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶口，但棉塞易使培养基丁燥，夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增加通气度，以利于发根。培养室要经常换气，改善室内的通气状况。液体振荡培养时，要考虑振荡的次数、振幅等

8、，同时要考虑容器的类型、培养基等。