旱半夏组织培养条件的优化研究

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1、旱半夏组织培养条件的优化研究王丽艳，荆瑞勇，谭焕波，唐敏，殷奎德【摘要】　　目的优化旱半夏的组织培养条件。方法以旱半夏小块茎为外植体进行组织培养。结果与结论使用卡拉胶代替琼脂固化，取得了良好的效果；旱半夏继代增殖最适培养基为：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L，增殖系数达到6.5，平均苗高达2.5cm；生根最适培养基为：1/2MS+NAA0.1mg/L，生根数4～5条，生根率达到100%。【关键词】旱半夏；组织培养；卡拉胶　　Abstract：ObjectiveTooptimizetissuecultureconditi

2、onofpinelliatenata(Thumb)Breit.MethodsS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L,thecoefficientofproliferationgetto6.5,theaverageheightis2.5cm,thesuitablerootingmediumis1/2MS+NAA0.1mg/L,therootingcountisabout4～5,andtheratioofrootinggetsto100%.　　Keyb.)Breit;Tissueculture;κ-Carrageenan半夏pin

3、elliatenata(Thunb.)Breit为天南星科多年生草本植物，以块茎入药，是一种重要的中药材。其性温，味辛，有小毒，归脾、胃、肺，经炮制后具有润燥化痰、降逆止呕、消痞散结之功效〔1〕。旱半夏多为野生，尽管具有明显的杂草性，但其繁殖系数较低，又缺乏有效的传播方式，因而是一种开拓性差的物种〔2〕。近年来随着连年采挖，野生资源日趋枯竭，远不能满足市场需求。人工栽培时，采用大块茎出售，珠芽、小块茎育苗，用种量大，成本高。小块茎无性繁殖易使半夏产量降低，品质退化，使半夏的栽培生产受到限制。利用组织培养建立半夏无性快速繁殖系统，可提高其

4、繁殖系数，同时可防止品种退化问题。　　本研究主要是对半夏组织培养条件进行优化，为大规模进行工厂化生产提供技术支持，前人研究中培养基使用琼脂固化，本研究尝试使用卡拉胶代替琼脂固化，取得了良好的效果，卡拉胶较琼脂价格低很多，因此可以为大规模进行工厂化生产节约成本。　　1材料与方法　　1.1材料旱半夏小块茎，购于安国市北方药材种子经销站。　　1.2消毒方法　　取健康的旱半夏小块茎，用清水洗净，放于超净工作台中灭过菌的空三角瓶中，先用含有吐温的0.1%的升汞溶液消毒10～12min，再用75%的酒精消毒30～60s，最后再用无菌水冲洗5～6次，

5、备用。　　1.3培养基及试验　　设计设计以MS、1/2MS为基本培养基，基于我们的研究目的旨在指导并应用于大生产，所以为尽量节约成本和适应大规模生产所需，本试验选择了细胞分裂素中效果较好且最为廉价常用的6-BA、生长素选择了NAA，以期筛选出适合于半夏生产的最佳培养基。发芽培养基：MS。　　继代增殖培养基：在MS培养基中分别附加BA0.5，1.0，2.0，3.0mg/L；NAA0.05，0.1，0.2，0.5mg/L；采用二因素完全随机设计（见表1）进行最适激素配比的筛选，共计16个处理组合（见表2），每个处理接4株无菌苗，重复3次。表

6、1激素配比二因素完全随机设计因素水平（略）生根培养基：在1/2MS培养基中分别附加0，0.01，0.05，0.10mg/LNAA。　　1.4培养条件　　所有培养基皆以浓度为0.7%的卡拉胶固化，含蔗糖均为3%，在高压灭菌前将pH值调至5.8，温度为（25±2）℃。光照1500～2000lx，每日光照时数12～14h。　　2结果　　2.1无菌苗的获得　　将小块茎接种到MS培养基中进行发芽培养，培养4～7d内进行观察统计发芽情况。观察统计发现，当培养7d时，小块茎的发芽率达到了100%，继续培养无菌苗长势良好。　　2.2继代增殖培养　　将小

7、块茎发芽得到的无菌苗接种到表2处理组合的培养基中，培养1周左右无菌苗上端死亡，而在基部开始膨大，培养2周时形成愈伤组织（见图1），培养3周时愈伤组织分化成苗（见图2），培养4周时对其进行观察和相关数据统计。　　从表2可见，1～6号培养基中组培苗没有增殖，而7～16号培养基均有一定程度的分化增殖，但是差别相对较大。从分化出的苗的高度以及增殖系数来看11号培养基最佳，增殖系数达到6.5，平均苗高达2.5cm。其他培养基的增殖系数分布在1.2～4.0之间，平均芽苗高分布在1.2～2.0之间。从而筛选出最适继代增殖培养基为：MS+6-BA2.0

8、mg/L+NAA0.5mg/L。继代分化增殖情况见图3。表2植物激素配比对旱半夏继代增殖培养的影响（略）　　2.3生根培养　　选择继代培养后生长健壮并且有一定高度的试管苗，将其分成单株，分别接种到生根培养基