第二章+植物组织培养的培养条件

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1、第二章植物组织培养的条件第一节植物组织培养的条件1.植物组织培养最基本的前提条件：用于培养的外植体细胞必须具有全能性2.离体隔离3.适宜的培养条件环境条件：光照、温度、湿度。营养条件：培养基。一、环境条件植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组织培养都是在23-27℃之间进行，一般采用25土2℃。温度组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光照时间方面：★一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。一般光照强度为1000~5000lx★光周期，最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。★光质，对愈伤组织诱导，

2、培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。光照Lightxhormoneresponses:湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件，容器内湿度要保持在99%左右，环境的相对湿度一般要求70％-80％的相对湿度。湿度其它因素渗透压培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此，而影响到渗透压的变化。通常1-2个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用，而5-6个大气压植物生长就会完全停止，6个大气压以上植物细胞就不能生存。其它因素通气状况氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。◆固体培养基可加进活性炭来增加

3、通气度,以利于发根。◆液体培养时，可考虑采取振荡培养的方式，以增加通气性。二、营养条件——培养基培养基：是离体培养的组织或者细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供的近似于生物体内生存的营养环境，满足其正常生长和维持其完整结构及功能。无机盐类：大量元素：C、H、O、N、P、K、S、Ca、Mg微量元素：Mo、Co、Mn、Cu、Zn、Fe等有机营养：碳源：蔗糖、葡萄糖、果糖氮源：氨基酸类、酰胺类活性物质：维生素类、肌醇、生物素等生长调节物质：生长素类：IAA、NAA、IBA等细胞分裂素类：激动素、玉米素等其它类：赤霉素、脱落酸、乙烯固化剂：琼脂、明胶、卡拉胶等培养基的组成

4、元素名称添加形式NKNO3,NH4NO3大量元素PKH2PO4,NaH2PO4KKCl,KNO3,(≥0.5mmol/LCaCaCl2·2H2O,Ca(NO3)2·4H20或100mg/l)MgMg2SO4·7H2OSMg2SO4·7H2O,Na2SO4微量元素FeFe-EDTA(Na2-EDTA+FeSO4·7H2O)BH3BO3MnMnSO4·7H2O(≤0.5mmol/L)CuCuSO4MoNa2MoO4·2H2OZnZnSO4·7H2OIKICoCoCl3MurashigeandSkoogstocksolutions(MSMedium)MacroelementsM

5、icroelements(>0.5mmol/L)(<0.5mmol/L)MgSO4.7H2O0.37g/lKI0.83mg/lNH4NO31.65g/lH3BO36.2mg/lKNO31.9g/lMnSO4.4H2O22.3mg/lCaCl20.33g/lZnSO4.7H208.6mg/lKH2PO40.17g/lNa2MoO4.2H2O0.25mg/lCuSO4.5H2O0.025mg/lCoCl2.6H2O0.025mg/lNa2.EDTA37.3g/lFeSO4.7H2O27.8mg/lMSsaltsreducedto0.47g.l-1MSsaltsincrease

6、dto9.52g.l-1培养基对非洲紫罗兰组织培养的影响Control碳水化合物选用种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等蔗糖浓度：使用量1-5%，常用量为2－3%，幼胚培养可提高到4－15%蔗糖具有热易变性，高压灭菌后部分糖会分解。蔗糖在培养基中的作用：1.为培养物提供能源和碳骨架2.可以调节培养基的渗透压Nosucrose(0%)Sucrosereducedto1%Sucroseincreasedto5%培养基对非洲紫罗兰组织培养的影响种类：VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、VB3（烟酸）、Vc、生物素、叶酸浓度：0.1－1.0mg/L作用：VB1全面促进生长，提高

7、活力VB6促根生长Vc抗氧化作用，防组织褐变维　生　素肌醇促进愈伤组织生长、胚状体和芽的形成对组织细胞繁殖、分化的促进作用浓度100mg/L椰乳：促愈伤组织和细胞培养，用量10－20%，香蕉泥：对PH值缓冲大，用量150－200ml/L马铃薯：对PH值缓冲大，用量150－200g/L，有利壮苗水解酪蛋白：浓度100－200mg/L，应用在微茎尖培养天然复合物Auxins——生长素诱导细胞的分裂和根的分化溶于95%乙醇或1mol/LNaOHNoNAANAAreducedto0.1mg.l-1NAAincreasedto5.0mg