植物组织培养设备和条件

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1、第二章实验室设计和培养条件第一节实验室设计及基本技术第二节植物组织培养所要求的环境条件第一节实验室设计及基本技术一、实验室组成二、仪器设备三、培养器皿及实验用具四、洗涤技术五、灭菌技术六、无菌操作组织培养实验室布局的总体要求便于隔离便于操作便于灭菌便于观察一、实验室组成基本实验室辅助实验室实验室组成准备室缓冲室无菌操作室培养室细胞生物学实验室温室生化分析实验室水槽实验台搁架培养架培养架培养架培养架药品及仪器柜无菌台无菌台搁架拉窗冰箱搁架电炉门4.5m3.0m3.5m4.0m准备室缓冲室无菌室培养室组织培养准备实验室准

2、备室缓冲室无菌室无菌室培养室培养架培养间二、仪器设备1）、基本仪器设备冰箱、电（磁）炉、酸度计、纯水器、天平、移液器、解剖镜、光照培养箱、摇床、生化培养箱、培养基分装器、搅拌器等。冰箱酸度计电炉天平纯水器培养基分装器搅拌器摇床体式显微镜倒置显微镜冷光源电磁搅拌器摇床2）、灭菌设备蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。蒸汽压力灭菌锅高压灭菌器干热消毒柜75%酒精喷雾器喷雾消毒器3）、无菌操作设备超净工作台二、设备、仪器超净工作台（一）设备1.紫外线灭菌灯2.日光灯3.工作台4.凳子5.搁物架6.

3、窗7.推拉门8.缓冲间无菌接种箱4、细胞培养设备摇床培养架HZC-250恒温振荡培养箱150C 250D光照培养箱光照培养箱烘箱5、细胞学鉴定设备光学显微镜、体视显微镜、倒置显微镜倒置显微镜光学显微镜电子天平（0.0001g，0.001g）酸度计1、玻璃器皿三、培养器皿及实验用具培养皿三角瓶培养瓶2、金属材质用具镊子解剖刀接种针（二）各类器皿1．器皿的类型（1）培养器皿三角瓶、培养瓶、圆形培养瓶、试管、L形管和T形管（2）分注器（3）刻度移液管（4）微量移液器（5）细菌过滤器（三）器械用具打孔器镊子解剖刀接种针剪刀电

4、热灭菌器四、洗涤技术1、玻璃器皿洗涤已用过的玻璃器皿1%稀HCl浸渍12h洗衣粉洗涤清水冲洗晾干备用新购置玻璃器皿2、塑料用品洗涤新的塑料器皿打开即用已用过的塑料器皿2%NaOH浸泡12h清水冲洗2%—5%盐酸浸泡30min清水冲洗蒸馏水冲洗晾干备用3、金属用品洗涤热洗衣粉水洗净冲洗擦干五、灭菌技术物理方法：干热、湿热、射线处理、过滤除菌等化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌1、灭菌方法2、灭菌（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法压力在0.1M—0.2MPa温度在121℃灭菌10—30min（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭

5、菌干热消毒灭菌饱和蒸汽压力与其对应的温度饱和蒸汽压力温度（℃）饱和蒸汽压力温度（℃）kg/cm21b/m2kg/cm21b/m20.00.1410.2810.4420.5630.7030.8440.98402468101214100103.6106.9109.8112.6115.2117.6119.91.0551.1251.2661.4061.5431.6811516182022243050121.0122.0124.1126.0127.8129.6134.5147.6（3）塑料器皿灭菌：多采用高压蒸汽消毒灭菌（4）

6、金属用具灭菌：灼烧灭菌浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用（5）接种室灭菌空气消毒灭菌接种室超净工作台紫外灯照射70%—75%的酒精擦洗培养材料的接种紫外灯照射（6）外植体灭菌流水冲洗10—20min或更长时间70%—75%酒精中浸泡30s0.1%—0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸馏水冲洗4—5次在10%的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡30min左右备用常用消毒剂消毒灭菌比较表消毒剂使用浓度（%）去除难易消毒时间（min）效果次氯酸钙次氯酸钠漂白粉溴水过氧化氢升汞酒精抗生素硝酸银9~102饱和溶液1~21

7、0~120.1~170~754~5（mg/L1易易易易最易较难易中较难5~305~305~302~105~152~100.2~230~605~30很好很好很好很好好最好好较好好消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射40min左右，后关闭。开启过滤风机，使无菌风吹拂工作台面和四周的台壁。用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手。（7）接种准备六、无菌操作实验员消毒实验室、无菌台灭菌实验器材的灭菌无菌接种消毒实验台卫生培养室培养植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的，要做到无菌的

8、条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。准备室：器具的洗涤、干燥、保存、灭菌，各种药品的储备、称量、溶解、配制、培养基分装等，设备：药品柜、防尘厨、冰箱、天平、纯水仪、酸度计、操作台、灭菌锅、烘箱。实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。化学室/准备室、接种室、培养室。小结接种室：植物材料的