产没食子酸脱羧酶的菌种筛选及其酶活研究.pdf

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1、第44卷第12期2016年12月化学工程CHEMICALENGINEERING(CHINA)V01．44No．12DeC．2016产没食子酸脱羧酶的菌种筛选及其酶活研究李文君1’2’3-．，王成章1’2’3⋯，张昌伟1’2’3⋯，叶建中1’2’3’4(1．中国林业科学研究院林产化学工业研究所；2．生物质化学利用国家工程实验室；3．国家林业局林产化学工程重点开放性实验室；4．江苏省生物质能源与材料重点实验室，江苏南京210042)摘要：为了筛选产没食子酸脱羧酶的菌种并对其相应的酶活性质进行研究，文中首先利用底物

2、诱导对可以产没食子酸脱羧酶的不同菌种进行了筛选，初步研究了没食子酸脱羧酶的专一性及影响其酶活的因素，由结果可知：待筛选的5株菌种均能降解没食子酸生成焦性没食子酸，其降解效果由强到弱为弗式柠檬酸杆菌(Citrobacterfreandii)CICC22001、阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)CICC10017、肠杆菌属(Enterobaeterspp．)CICC23468、阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)CICC20772、阴沟肠杆菌(Enterobactercfo∞船)

3、CICC20804；没食子酸脱羧酶(GAD)对没食子酸具有较强的专一性，在粗酶液5．OmL，没食子酸0．4mg／mL，发酵温度35℃，磷酸盐缓冲溶液pH=6．0对其酶活的促进作用最强，而金属离子的促进作用强弱为M92+>Sn2+>Cu2+>Zn2+>K+>Ca2+>Fe2+，添加剂的抑制作用强弱为EDTA>SDS>TritonX-100>Tween20。关键词：没食子酸脱羧酶；微生物降解；焦性没食子酸；酶学性质中图分类号：Q814．1文献标识码：A文章编号：1005-9954(2016)12-0001-06D

4、OI：10．3969／j．issn．1005-9954．2016．12．00lScreenthestra"ofproducinggllicaciddecarboxvlaseandcreentllestrainsorproducinggallicacilldeCarDOXylaSeenzymicacUvities●·-●-‘LIWen．Junl’2’3’4，wANGCheng．Zhan91M4，zHANGChang．weil．2'3，4’ⅦJian-Zhon91M4(1．InstituteofChemicalI

5、ndustryofForestProducts，CAF；2．NationalEngineeringLab．forBiomassChemicalUtilization；3．KeyandOpenLab．ofForestChemicalEngineering，SFA；4．KeyLab．ofBiomassEnerg)randMaterial，Nanjing210042，JiangsuProvince，China)Abstract：Inordertoscreenthestrainstoproducethegallica

6、ciddecarbolxylaseandstudyoftheirenzymicactivities，thedifferentbacterialstrainswiththeabilitiesofdegradinggallicacidwerescreenedbythesubstrateinductiontest．andtheenzymaticspecificityandpropertieswerestudiedpreliminarily．’rheresultsshowthatallof5screeningstra

7、inscandegradegallicacidtopyrogallol，andtheireffectfromstrongtoweakisCitrobacterfreandiiCICC22001，EnterobactercloacaeCICC10017，Enterobacterspp．CICC23468，EnterobactercloacaeCICC20772，EnterobactercloacaeCICC20804；GADhasstrongenzymaticspecificityindegradinggall

8、icacid．Phosphatebuffersolutionhasthestrongestpromotingeffectat5．0mLGAD，0．4mg／mLgallicacid，35℃fermentationtemperature．andpH6．0．TheeffectofmetalionsonGADfromstrongtoweakisM92+>Sn2+>Cu2+>Zn2+>K+>Ca2+>Fe2+