一株产纤维素酶细菌的分离鉴定及产酶条件初探.pdf

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1、150广东农业科学2014年第19期一株产纤维素酶细菌的分离鉴定及产酶条件初探许云，汪倩，易太鲜，赵同建(海南大学农学院，海南海口570228)摘要：对从海南大学薯蓣种质资源圃的不同大薯根部土壤中分离的产纤维素酶细菌X一6进行鉴定及产酶条件研究。采用细胞学染色、生理生化指标、16SrRNA基因序列同源性分析测定等方法对菌株进行鉴定，并采用正交试验研究培养时间、温度、pH值和碳氮比等因素对菌株产纤维素酶活力的影响，初步确定其产纤维素酶的最优条件组合。菌株X一6鉴定为蜡状芽孢杆菌、革兰氏阳性菌，菌株芽孢着生在细菌中部位置，淀粉酶、明胶水解酶阳性。GenBank中X一6菌株的16Sr

2、RNA基因序列与HQ844479BacilluscereusstrainJSYM28相似性最高(99％)。菌株的最优培养条件为：培养基碳氮比为2：4，pH7．0，42℃培养72h，在此条件下CMC酶活力和滤纸酶活力分别为137．10、171．07U，mL。关键词：纤维素酶：鉴定：产酶条件中图分类号：Q939．97文献标识码：A文章编号：1004—874X(2014)19—0150—04Isolationandidentification0facellulase—pr0ducingbacteria1●●●J1‘·■●··-_-·‘andDreIlmlnarVStucI_v0nit

3、slermentationconditionsXUYun，WANGQian，YITai—xian，ZHAOTong-jian(CollegeofAgronomy,HainanUniversity,H~kou570228，China)Abstract：Cytologicalstaining，physiologicalandbiochemicalcharacteristics，and16SrRNAgenesequencesanalysiswereutilizedtoidentifycellulase—producingbacteriaX一6．whichwasisolatedfrom

4、rootsoilsofthedifferentwateryamsinYamGermplasmResourcesofHainanUniversity．Thenorthogonalexperimentdesignswereappliedtostudytheeffectsofincubationtime，temperature，pHandratioofcarbon-nitrogenonthecellulase-producingenzymeactivityofX-6．TheresultsshowedthatthestrainX一6wasidentifiedasBacilluscere

5、us，withGram—positive，amylase—positive，gelatinase—positiveandsporeinthemiddleofthebacteriumcel1．Its16SrRNAgenewashi【ghlysimilartoBacilluscereusJSYM28，andthesimilaritywas99％．TheoptimalfermentationconditionswereasfollowingvalueofpHwas7．0，theratioofcarbon—nitrogenwas2：4，thetemperaturewas42~Cfor7

6、2h．Undertheoptimalfermentationconditions，CMCandFPAenzymeactivitywererespectively137．10U／mLand171．07U／mL．Keywords：cellulase；identification；fermentationcondition纤维素是自然界中最丰富的天然可再生资源，而到数十株产生碱性纤维素酶的芽孢杆菌和嗜碱性链微生物降解是纤维素资源化利用最环保的处理方式，霉菌，如日本花王公司的Bacillussp．KSM系列[2-61、纤维素资源和纤维素酶已经成为国内外研究的热点HSH一810[71、J

7、S1[81、N6—27菌株[91以及Streptomyeessp．领域．其中细菌产生的中性和碱性磷酸酶受到各国洗KSM一9t蚓、$36—2t“】和llAG8t挖1等，其中只有嗜碱芽孢剂、纺织、造纸、环保等行业的普遍重视。碱性纤维素杆菌KSM一635是唯一报道已工业化生产的菌株。目酶最早在1972年由日本理化研究所从嗜碱芽孢杆菌前，国内中性和碱性纤维素酶产生菌的产酶能力活性的培养物中获得【l】。随后，国内外学者又陆续分离筛选较低，通过优化培养条件以及对野生菌株进行诱变等处理方法，可使酶活提高2