一株产低温纤维素酶细菌的初步分析

《一株产低温纤维素酶细菌的初步分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、生物学通报2010年第45卷第8期一株产低温纤维素酶细菌的初步分析侯进慧孙会刚郑宝刚田力蔡侃(徐州工程学院江苏徐州221008)摘要从农田、农产品果实表面获得的多株产纤维素酶细菌中，筛选到一株产低温纤维素酶活性较高的菌株T34，使用PCIL方法克隆到长度为1419bp的16SrDNA序列。提交到美国国立生物技术信息中心NCBI基因库中，序列号是：FJ796222。利用生物信息学方法分析该序列，将该菌分类为Baciflussp．。分析其产酶条件，发现其在20％2时产酶活性最高。关键词纤维素酶低温BaciHus中国图书分类号：Q55文献标识码：B纤维素是世界上最丰富的碳水化合物资源，但白

2、胨10g，酵母膏5g，NaC110g，去离子水定溶是由于这种由葡萄糖聚合而成的高分子化合物难至1L，灭菌备用。产纤维素酶菌株筛选培养基：于分解，加上目前研究获得的纤维素酶活性都较羧甲基纤维素10g，蛋白胨1Og，酵母膏5g，低。并且不同种类纤维素酶的最适条件也受到温KH2PO41g，MgSO40．2g，NaC110g，葡萄糖2g，度、pH值等很多因素的限制，导致纤维素资源的利琼脂12g，去离子水定溶至1L，灭菌备用。摇瓶用率一直处在很低的水平。对于秸秆等纤维素资源发酵培养基：蛋白胨1．0％、酵母粉1．0％、CMC的焚烧，既危害生态平衡，又会加重环境污染。如果1．O％、NaC10．5％

3、、KH2PO40．1％，灭菌后使用。采用生物的方法将这些纤维素资源转化为可以利3)试剂药品。实验常规的分析纯生化试剂和用的葡萄糖．那么它们就可以作为单细胞蛋白质、PCR反应引物购自于“上海生工生物工程技术服酒精、生物燃料的生产原料，对于解决食品短缺、环务有限公司”。境污染和能源危机等世界性难题都有着深远的意1．2产纤维素酶菌株筛选⋯将采集的样品培义，这也符合科学发展观和可持续发展的战略。在养2～4d，然后将0．5％的刚果红倒人培养基中染农产品加工过程中，纤维素酶也有着广泛应用[1-2]。色5min，使用5％的NaC1溶液浸泡脱色1h。如本文从农田、农产品果实表面筛选到一株产低果菌落周

4、围出现透明水解圈，则说明该菌株产分温纤维素酶活性较高的菌株T34，利用生物信息学泌性纤维素酶。手段分析其16SrDNA序列，对其进行了鉴定。对1．3菌株形态分析分析菌落特征．在显微镜下产低温纤维素酶菌株的分析，可扩展纤维素资源的观察细菌形态。利用范围。对筛选的菌株进行分类，是研究产酶菌1．4菌株生长情况分析将菌种接种到LB培养株的基础工作，也是微生物检验的必要程序，本文基，在28℃的摇床上．以180rpm转速进行连续培的分析方法为相应研究提供了有价值的参考。养，通过测量液体培养基中细菌的OD鲫值，确定1材料与方法菌株生长状况，制作生长曲线。1．1实验材料1．5酶菌株的16SrDNA序

5、列分析提取菌株基1)菌株采集。本实验筛选到的产纤维素酶菌因组DNA[5]，根据细菌16SrDNA序列保守性设株分离自农田土壤和农产品果实表面。将采集的计通用引物：样品在实验室中用LB液体培养基进行梯度稀释，F：AGAG1TGATCCTGGCTCAG涂布于LB固体培养基上，于28℃恒温培养箱中培R：GGTTACCTrGTrACGACTT养长出菌落后，再将菌落转接到产纤维素酶菌株PCR反应步骤是：①95％预变性5rain；②筛选培养基，在28℃恒温培养箱中培养2～4d。94℃变性30S；~57~c退火60s；~72oc延伸90s，2)培养基1。LB(Lufia—Be~ani)培养基：胰蛋

6、重复步骤2～4，22个循环；⑤72~C延伸10rain。基金项目：徐州市科技计划项目(XZZD0924)，徐州工程学院校级科研项目(XKY2008110)2010年第45卷第8期生物学通报45PCR反应扩增出的16SrDNA片段送“上海生工2．2菌株T34生长状况通过连续测量液体培生物工程技术服务有限公司”测序。将16SrDNA养基中菌株T34的OD鲫值，确定该菌在28~C的序列登录到NCBI网站上，获得基因序列号。使用生长曲线(如图2)。BLAST程序在GeneBank基因库中比对序列，分析产酶菌株的分类地位。1．6产酶条件分析以葡萄糖含量(mg／mL)为横坐标。以吸光度值为纵坐标

7、，绘制标准曲线Il9]。鍪使用羧甲基纤维素钠作为底物，与3，5一二硝基水杨酸反应．在540nm波长下比色，根据A540nmO．5计算CMCase酶活力'7]。O2456789l0Il121314151617182结果时问(h)2．1筛选到产低温纤维素酶菌株通过实验，筛图2菌株T34的生长曲线选到5O多株产纤维素酶菌株。确定在低温条件下2．316SrDNA分析通过8F和1492R2个引纤维素酶活性较高的菌株T34，其菌落分散分布，物双向测序获得菌株T34的1