产纤维素酶的海洋细菌的筛选及初步鉴定【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）产纤维素酶的海洋细菌的筛选及初步鉴定目录中英文摘要1.引言11.1纤维素酶研究简介11.2纤维素酶的应用21.2.1在饲料工业上的应用21.2.2在造纸业中的应用21.3细菌纤维素酶的优势31.4海洋细菌纤维素酶的特性31.5课题意义32.材料与方法52.1实验材料52.1.1培养基52.1.2试剂52.1.3引物52.1.4菌种52.2实验方法52.2.1初筛52.2.2复筛62.2.3鉴定63.结果与分析83.1初筛结果83.2复筛结果103.3菌株E-9和W-8的分子鉴定结果114.小结12致谢13参考文献14摘要：为筛选出纤维素酶高产菌，从宁波

2、大学实验室取得150株海洋细菌菌株，复苏后在CMC-Na选择培养基上培养，经刚果红染色法，菌落周围产生透明圈的有38株，透明圈与菌落直径比(Hc)大于3的有9株，其中编号为E-9和W-8的菌株Hc值最大都为4.25。用DNS法对这9株菌进行复筛，筛选出CMC酶活和滤纸酶活都较高的菌株，仍为E-9和W-8，其中菌株E-9的CMC酶活和FPA分别为11.5U和5.67U，菌株W-8的CMC酶活和FPA分别为11.1U和5.41U。经16SrDNA法鉴定，菌株E-9和W-8分别与Thalassobacterstenotrophicus和Maribacterdokdonensis的16

3、SrDNA系列具有较高的相似性，相似度分别为95%和99%。关键词：海洋细菌；纤维素酶；筛选；16SrDNAAbstract：Inordertoobtainthecellulaseproducingbacteria,150marinebacteriafromourlaboratorywerescreenedbasedontheCMC-Namediumplant.Theresultsshowed38of150strainscouldproducecellulase.Amongthem,9strainshavehigheractivity(Hc>3).TheHcofE-9andW-

4、8wasthehighest(Hc=4.25).TheanalysisofE-9basedonCMCaseactivityandFPAwas11.5Uand5.67U,respectively.TheW-8was11.1Uand5.41U,respectively.Molecularphylogeneticanalysisofmarinebacteriabaseon16SrDNAsequencesindicatedthattheyexhibitedthehightestsimilarity(95%and99%,respectively)tothe16SrDNAfragments

5、ofThalassobacterstenotrophicusandMaribacterdokdonensis。Keywords:marinebacteria;cellulase;screening;16SrDNA1.引言1.1纤维素酶研究简介纤维素物质是世界上最丰富的却又未得到充分利用的可再生性物质资源宝库，它将是人类未来的能量、食物和化工原料的主要来源。合理开发和科学利用这一丰厚天然资源是世界各国研究开发的重点领域。利用微生物生产的纤维素酶将其转化为人类急需的能源食物和化工原料，对于人类社会的可持续发展具有非常重要的意义。筛选出产高活性纤维素酶的菌株是开发利用纤维素资源的前提

6、和关键。纤维素是绿色植物细胞壁的主要成份，是自然界中含量最丰富的有机碳水化合物，生物界最重要的碳源。纤维素属于多糖，由毗喃葡萄糖分子通过β（1-4）糖昔键缩合生成的线性大分子多聚物。纤维二糖是其基本单元。纤维素分子的大小由聚合度(DP)定义，即：一个分子所含葡萄糖残基数。植物纤维素DP~14000，微生物纤维素DP~3500，商品纤维素DP~50一5000[1]。目前纤维素被彻底分解而又无污染的一条有效途径是利用纤维素酶的水解作用。利用纤维素酶将纤维素水解成葡萄糖称为纤维素的生物转化工艺，生物转化的关键就是纤维素酶的生产。纤维素酶是一组能够降解纤维素生成葡萄糖的酶的总称,是一个

7、有多种水解酶组成的复合酶系。根据其作用方式一般可将纤维素酶分为内切葡聚糖酶（EG）、外切葡聚糖酶（CHB）和β-葡萄糖苷酶（BG）[2]。在这3种酶的协同作用下,纤维素最终被分解成葡萄糖。纤维素酶来源非常广泛，如昆虫、软体动物、原生动物、细菌、放线菌、真菌等都能产生纤维素酶。目前用于生产纤维素酶的微生物大多属于真菌，研究较多的有木霉属、曲霉属、根霉属和漆斑霉属[3]，其中丝状真菌木霉属被公认是产纤维素酶最高的菌种之一[4]。有许多种木霉不但分泌的纤维素酶产量高，而且纤维素酶系的三种组分（葡聚