反向杂交检测肝癌相关乙型肝炎病毒前C区突变方法的建立和应用.pdf

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1、中国癌症杂志2014年第24卷第4期266CHINA0NCOLOGY2014Vo1．24No．4反向杂交检测肝癌相关乙型肝炎病毒前C区突变方法的建立和应用赵芝梅朱宇吴燕樊春笋陈陶阳甘愉屠红1．上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室，上海200032；2．启东肝癌防治研究所，启东肿瘤医院病因室，江苏启东226200[摘要]背景与目的：日益增多的研究表明，乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)DNA前c区G1896A和G1899A突变是肝癌发生的危险因素。本研究旨在建立简单、快速、灵敏和准确的检测HBV前C区突

2、变的反向杂交方法，并应用于检测江苏省启东地区HBVDNA前C区突变与肝癌发生的关系。方法：设计并合成HBVDNA前C区1896和1899位点的特异性探针，通过优化条件建立特异、敏感的杂交体系，并与直接测序检测结果进行比较。将该方法应用于检测启东i00例肝癌和100例慢性HBV携带者(对照组)，分析HBVDNA前C区突变与肝癌的关系。结果：反向杂交对血清样本的最低检测下限为HBVDNA10。copy／mL，检测混合感染时比直接测序更占优势，混合株中10％以上的突变株均可被检测。启东地区HBVDNA前C区G1899A突变与肝癌高发具有相关性(P=O．000，OR=

3、4．846，95％CI：2．24010．485)，而G1896A突变未见其相关性。结论：反向杂交检~UHBVDNA前C区突变方便、快速、准确，可有效监控肝癌的发生，适合临床大规模推广应用。[关键词】乙型肝炎病毒；前C区；反向杂交；突变：肝癌DOI：10．3969d．issn．1007-3969．2014．04．005中图分类号：R735．7文献标志码：A文章编号：1007．3639(2014)04—0266—07Developmentandapplicationofareversehybridizationmethodfordetectionofhepatit

4、isBvirusprecoremutationassociatedwithhepat0ceUularcarcinomaZHA0Zhi．mei，ZHUYll，WUYan，Chun—sun，CHENTao-yang，GANYu，TUHong。(1．StateKeyLaboratoryofOncogenesandRelatedGenes，ShanghaiCancerInstitute，RenjiHospital，ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine，Shanghai200032，China；2．QidongLiverC

5、ancerInstitute，QidongTumorHospital，QidongJiangsu226200，China)Correspondencet0：TuHongE—mail：tuhong@shsci．org[AbstraetJBackgroundandpurpose：ItwasreposedthatG1896AandG1899AmutationinthehepatitisBvirus(HBV)precoreregionwereallsignificantlyassociatedwithhepatocellularcarcinoma(HCC)．Simpl

6、e，sensitiveandreliablemethodstodetectprecoremutationsareneededinordertopreventtheoccurrenceofHCCinclinicaldetection．TheaimofthisstudywastodevelopasimpleandsensitivereversehybridizationmethodforthedetectionofHBVprecoremutationinHBVcarriers．Thismethodwasappliedforexploringtherelations

7、hipbetweentheprecoremutationsandHCCinpatientsofQidong，JiangsuProvince．Methods：Thespecificprobesofnt．1896andnt．1899weredesignedandsynthesized．Inordertoimprovethesensitivityandspecificity,reactionconditionsofreversehybridizationwereoptimized．Weusedreversehybridizationtodetect50HCCseru

8、nlsamplesandcompare