食管癌细胞周边MC迁移的模型的建立及其在化疗中的应用.pdf

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1、硕硕士士学学位位论论文文食管癌细胞周边MC迁移的模型的建立及其在化疗题目中的应用TheEstablishingofMCMigrationModelaroundEsophagealCancerCellsandItsApplicationin英文题目Chemotherapy姓名刘柳学号10920013所在学院汕头大学医学院导师姓名林珏龙副教授专业生物化学与分子生物学入学日期2009年9月答辩日期2012年6月汕头大学医学院硕士学位论文学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外

2、，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日

3、期：年月日汕头大学医学院硕士学位论文摘要背景和目的背景：食管癌是一种常见的恶性肿瘤，潮汕地区是我国食管癌六大高发区之一，其死亡率一直高居不下。食管癌治疗的基础研究一直是我们孜孜不倦探索的课题。多数研究发现肥大细胞不仅作为免疫效应细胞在炎症反应中扮演着重要角色，还发现肿瘤生长过程与生物机体的癌细胞周围肥大细胞(mastcell,MC)的募集与浸润有关系，如肠癌，胃癌，子宫内膜癌，甲状腺癌等癌组织周围有MC聚集。肥大细胞能调控肿瘤的进展以及血管的生成。又如抗肿瘤药物三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)对于多种恶性肿瘤细胞（如

4、胃癌、肝癌、神经胶质瘤和子宫内膜癌等）具有诱导凋亡或抑制作用。另有研究表明抗肿瘤药物As2O3还可影响细胞微丝骨架蛋白F-actin的重组。肌动蛋白细胞骨架除了维持细胞形态及结构框架和细胞极性外，与细胞的黏着、延伸和迁移有密切相关。用As2O3干扰肿瘤细胞微丝骨架蛋白，不仅影响细胞周期、细胞形态以及细胞极性还会影响着肿瘤细胞的黏着、延伸和迁移能力。鉴于以往多数研究均在肿瘤细胞培养或有免疫缺陷的生物机体进行，无法实现肿瘤细胞、免疫炎性细胞及抗肿瘤药物As2O3三者之间的复杂关系的研究。因此，本研究利用食管癌EC109细胞及一系列处理引入小鼠腹

5、腔，建立癌细胞与肥大细胞迁移的动物模型，以此探讨化疗药物As2O3对癌细胞生长的影响。目的：建立小鼠肥大细胞迁移的动物模型，探讨生物机体的免疫功能调节及化疗药物对人食管癌EC109细胞株生长的影响。方法利用肥大细胞的特征性蛋白酶抗体和鬼比环肽等免疫荧光及PI标记；以流式细胞术检测并分析小鼠腹腔液中肥大细胞亚型的百分率及肿瘤细胞周期变化和各期细胞内F-肌动蛋白(fibrosactin,F-actin)含量的变化；使用激光扫描共聚焦显微镜显示肥大细胞内分泌颗粒的分布。通过westernblotting方法检测小鼠肠组织类胰蛋白酶和类糜蛋白酶的表

6、达，并通过组织化学方法，观察各种诱导处理后小鼠肠组织肥大细胞由肠道向腹腔移动的变化。结果1.根据流式细胞仪点图分布分析，将小鼠肥大细胞分为：类胰蛋白酶阳性、类糜蛋白酶阴性(MCT)；类糜蛋白酶阳性、类胰蛋白酶阴性(MCC)和类胰蛋白酶阳性、类糜蛋白酶I汕头大学医学院硕士学位论文阳性(MCTC)三种亚型，且T型MC明显多余TC型和C型(P<0.05)。2.以共聚焦显微镜显示三种亚型的MC均含有丰富的分泌颗粒并分布于细胞膜内侧，为其出芽突起形成储备的状态。3.经组织切片观察到诱导处理后小鼠肠组织MC由肠道向腹腔移动，且胰酶对MC的诱导作用大于食

7、管癌细胞和As2O3。4.经诱导迁移入腹腔的MC，迅速升高G0/G1期细胞及降低S期细胞内的F-actin含量，DNA检测结果显示G0/G1期的肿瘤细胞数量迅速增加(p<0.05)，S期细胞含量降低；G2/M期细胞数量增加，MC可能与癌细胞周期由S期向G2/M期跨越相关。5.三氧化二砷作用下，食管癌细胞的G0/G1期细胞数升高，S期下降，能延迟食管癌细胞的G0/G1期，阻碍细胞向S期跨越，且食管癌细胞中F-actin含量降低，尤其是S期。诱导肥大细胞迁移入腹腔的同时，As2O3作用下，食管癌细胞各期的F-actin含量均下降，其G0/G1期

8、细胞数量显著增加。结论1.小鼠肥大细胞分为T型、TC型和C型三种亚型。三种亚型的MC均含有丰富的分泌颗粒并分布于细胞膜内侧。2.食管癌EC109细胞株及其一系列对比处理移入小鼠腹