稳定表达egfp人食管癌细胞系及其可视化动物模型的建立

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1、硕士学位论文稳定表达EGFP人食管癌细胞系及其可视化动物模型题目的建立EstablishaEGFP-labeledhumanesophageal英文题目carcinomacelllineandits’visualizedanimalmodel姓名张晓辉学号10920208所在学院汕头大学医学院导师姓名谢良喜专业肿瘤学入学日期2009年9月答辩日期2012年5月学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在

2、论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日稳定表达EGFP人食管癌细胞系及其可视化动物模型的建立EstablishaEGFP-labeledhu

3、manesophagealcarcinomacelllineandits’visualizedanimalmodel硕士研究生：张晓辉导师：谢良喜副主任医师专业名称：肿瘤学申请学位：医学硕士入学时间：2009年9月论文答辩时间：2012年5月汕头大学医学院硕士学位论文稳定表达EGFP人食管癌细胞系及其可视化动物模型的建立中文摘要目的：利用EGFP表达质粒转染食管癌EC9706细胞系，建立稳定表达EGFP的细胞系EC9706-EGFP；对比EGFP转染对EC9706细胞系细胞生物学特性的影响；进而建立SCID小鼠皮下移植模型，并通过活体荧光成像系统进行分子成像观

4、察。方法：将pEGFP-C1、pEGFP-C3、pIRES2-EGFP、pIRES-hrEGFP四种质粒扩增后，利用质粒提取试剂盒分别进行提取、纯化及鉴定。分别利用以上四种质粒对EC9706细胞系进行瞬时转染，通过荧光显微镜选择出荧光表达率最高的质粒。利用最佳质粒对EC9706细胞系进行稳定转染，通过G418耐药筛选及有限稀释法，筛选出单细胞生长并表达荧光的克隆进行扩大培养，建立稳定表达EGFP的细胞系EC9706-EGFP。通过细胞生长曲线、细胞侵袭性实验分析转染前后的EC9706细胞特性有无差别。利用EC9706-EGFP对SCID小鼠进行皮下接种，3周后

5、通过活体成像系统观察并解剖小鼠，对皮下肿物进行HE染色，将病理学结果与荧光成像的结果进行对比。结果：pEGFP-C1、pEGFP-C3、pIRES2-EGFP、pIRES-hrEGFP四种质粒纯度分别为1.84、1.79、1.81、1.83，且酶切及测序结果与四种质粒的特性完全符合，证明该四种质粒纯度均较高，可用于后续实验。通过瞬时转染显示经pEGFP-C1质粒转染的细胞荧光表达率最高。利用pEGFP-C1质粒对EC9706细胞系进行稳定转染，成功建立了稳定表达EGFP基因的细胞株EC9706-EGFP。细胞生长曲线、细胞侵袭性，实验显示转染前后两组细胞的生长

6、和侵袭性未见明显差异。利用EC9706-EGFP建立SCID小鼠皮下移植模型,3周后行活体成像观察，发现皮下肿物信号能很好地被活体荧光成像系统探测到。处死小鼠收获皮下瘤行病理检查，见皮下肿物符合鳞状细胞癌特征，证实了活体成像的结果。结论：利用pEGFP-C1质粒转染食管癌EC9706细胞可以获得稳定表达EGFP的细胞株。外源基因EGFP的转染并未对食管癌EC9706细胞的生长和侵袭性产生影响。利用EC9706-EGFP细胞系对SCID小鼠进行皮下接种，可以成功建立可视化的SCID小鼠皮下移植模型。关键词：食管肿瘤；绿色荧光蛋白；动物模型；活体荧光成像系统I汕头

7、大学医学院硕士学位论文稳定表达EGFP人食管癌细胞系及其可视化动物模型的建立AbstractObjective：ToestablishahumanEGFP-labeledesophagealcacinomacelllineanditsvisualizedsubcutaneousanimalmodelandtoperformapilotimagingobservationonanimalsubcutaneousxenografts.Methods：Fourplasmids,pEGFP-C1,pEGFP-C3,pIRES2-EGFPandpIRES-hrEGFP,

8、wereamplified.After